wako磷酸化蛋白電泳試劑- Phos-tag (TM) Acrylamide

發(fā)表于由

磷酸化蛋白電泳試劑——wako Phos-tag (TM) Acrylamide

什么是Phos-tag?

Phos-tag ? 是一種能與磷酸離子特異性結(jié)合的功能性分子，結(jié)合特異性與氨基酸的種類和序列無關(guān)，無放射性，無需特意制備磷酸化抗體。它可用于磷酸化蛋白的分離（Phos-tag? Acrylamide）、Western Blot 檢測（Phos-tag ? Biotin）、蛋白純化 （Phos-tag ? Agarose）及質(zhì)譜分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag ? Mass Analytical Kit） 。

Phos-tag的基本結(jié)構(gòu)：

 

 

 

 

 

 

1. Phos-tag? Acrylamide

Phos-tag? Acrylamide SDS-PAGE可根據(jù)遷移率不同，區(qū)分磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白。該方法只需在常規(guī)的SDS-PAGE膠中添加Phos-tag? Acrylamide和MnCl2即可進行實驗（制膠過程中添加，如需詳細說明請聯(lián)系我們）。

特點
# 非放射性元素，非熒光物質(zhì)
# 磷酸化蛋白亞型可以在同一電泳道分離出多條帶
# 操作簡便，與常規(guī)SDS-PAGE蛋白電泳相似
# Phos-tag? 的結(jié)合特異性與氨基酸種類、序列無關(guān)
# Phos-tag? SDS-PAGE實驗后，可進行常規(guī)的免疫組化、質(zhì)譜等
# 性質(zhì)穩(wěn)定，溶于蒸餾水后可以穩(wěn)定保存至少3個月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同時被分離檢測
# 不同位點磷酸化修飾以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因遷移率不同而被分離開來

原理

應(yīng)用

1、黃色粘性油狀物質(zhì)；

2、在4度可保存至少一年；

3、Phos-tagTM與丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分離膠主要成分)結(jié)合分離磷酸化和非磷酸化蛋白。

SDS-PAGE分離膠制備中添加金屬離子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。

在蛋白電泳過程中，磷酸化基團與金屬離子螯合的Phos-tagTM Acrylamide發(fā)生特異性結(jié)合，導(dǎo)致磷酸化蛋白的遷移速度變慢。

Phos-tag? Acrylamide可根據(jù)遷移率不同，區(qū)分磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白。無放射性、非化學(xué)物質(zhì)標記。不同位點磷酸化修飾的蛋白在同一泳道中因遷移率不同而被分離開來。

操作過程與普通SDS-PAGE相類似。Phos-tagTM的特異性結(jié)合與氨基酸種類、序列無關(guān)。

適用于免疫印跡、質(zhì)譜分析等后續(xù)工作?？勺R別磷酸化和非磷酸化蛋白。

Phos-tagTM母液可穩(wěn)定保存至少3個月。

可檢測出具有不同磷酸基團數(shù)目的蛋白。無需特意制備磷酸化抗體。

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 原價
304-93526 Phos-tag? Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3ml 2670
300-93523 Phos-tag? Acrylamide AAL-107 2mg 4450
304-93521 Phos-tag? Acrylamide AAL-107 10mg 10680

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)? ? ?Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]? Protocol(點擊進入下載)


Phos-tag Acrylamide (AAL-107)? ?Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]? Protocol(點擊進入下載)

 

 

References ?參考文獻：

    1. “Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

 

    1. “Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
      Proteomics      , 5, 749-757 (2006).

 

    1. “A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Anal. Biochem., 361, 294-298 (2007).

 

    1. “Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

 

    1. “Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity Polyacrylamide gel”, S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro, Anal. Biochem., 360, 160-162 (2007).

 

    1. “A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike, Anal. Biochem., 378, 102-104 (2008).

 

    1. “Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike, Proteomics, 8, 2994-3003 (2008).

 

    1. “FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

 

    1. “Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, and T. Koike, Electrophoresis, 30, 550-559 (2009).

 

    1. “Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

 

    1. “Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike, Proteomics, 9, 4098-101 (2009).

 

  1. “Separation and detection of large phosphoproteins by using Phos-tag SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Nature Protocols, 4, 1513-21 (2009).