上海金金畔生物科技有限公司提供D5-氨基甲酸乙酯 標準品 2015年國標法

【事件背景】氨基甲酸乙酯是發(fā)酵食物和酒精飲品在發(fā)酵或貯存過程中天然產(chǎn)生的污染物，可以引起肺腫瘤、淋巴癌、肝癌、皮膚癌等。氨基甲酸乙酯過去曾用于人類醫(yī)藥用途，但因為含有毒性且療效欠佳，現(xiàn)已禁用。不同的酒精飲品檢出的氨基甲酸乙酯含量不一。 例如烈酒（特別是由櫻桃、杏和梅等核果制造的烈酒）的含量一般較高，而啤酒的含量則偏低。不同種類的酒精飲品的氨基甲酸乙酯含量差異很大。由于氨基甲酸乙酯含基因毒性，小鼠長期口服此類物質(zhì)會產(chǎn)生各種癌瘤。2007年，世界衛(wèi)生組織的國際癌癥研究機構(gòu)( IARC) 正式將氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 歸為2A類致癌物。 2009年開始，已經(jīng)有題為《固相萃取一氣相色譜法測定葡萄酒中的氨基甲酸乙酯》的論文出版公示，自此酒精飲品中氨基甲酸乙酯的測定為民眾關(guān)注。2012年，隨著白酒中塑化劑事件愈演愈烈，酒精飲品和發(fā)酵物品中氨基甲酸乙酯檢測問題再一次被提上日程。

【國標出臺】 2015年初，《食品安全國家標準 食品中氨基甲酸乙酯的測定》（GB 5009.223-2014）公布，其規(guī)定了啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒等酒類以及醬油中氨基甲酸乙酯含量的氣相色譜-質(zhì)譜法測定。標準適用于啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒等酒類以及醬油中氨基甲酸乙酯含量的測定。此標準為強制標準，即具有法律屬性，在一定范圍內(nèi)通過法律、行政法規(guī)等手段強制執(zhí)行的標準。

自此，致癌物-氨基甲酸乙酯的含量和檢測，成為酒精飲品和發(fā)酵食品相關(guān)企業(yè)、機構(gòu)、檢驗檢測機構(gòu)不得不說的“秘密”！在國家強制標準驗證階段，我們已經(jīng)開發(fā)并優(yōu)化了符合國家標準方法的堿性硅藻土柱，推出成熟的商品化產(chǎn)品Cleanert EC氨基甲酸乙酯專用固相萃取柱（堿性硅藻土），適逢2015年新版國標出臺，此產(chǎn)品完美貼合此項標準！

GB 5009.223-2014標準中提到的“堿性硅藻土固相萃取柱” 并未提到填料處理方法，客戶盲目尋找柱子，未必符合國家標準！博納艾杰爾經(jīng)過大量標準驗證，確保Cleanert EC柱（訂貨號：EC200012）結(jié)合國標產(chǎn)品進行白酒中氨基甲酸乙酯測定，檢出限為2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，完全滿足食品安全國家標準GB5009.223-2014方法的檢測要求。（具體檢測方法見下文） ！

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酒中氨基甲酸乙酯的測定

MF00013

方法一、GC-MS 法 參照GB 5009.223-2014

摘要：本文參照食品安全國家標準方法《GB 5009.223-2003 食品中氨基甲酸乙酯的測定》 ，進行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的測定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯專用固相萃取柱（堿性硅藻土）進行樣品前處理，GC-MS法測定，結(jié)果表明氨基甲酸乙酯檢出限為2.0μg/kg，定量限為5.0 μg / kg（取樣2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒樣品的日間精密度測試，RSD<3%。方法簡單，產(chǎn)品穩(wěn)定，結(jié)果準確靈敏，完全滿足分析檢測的要求。

氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一種致癌物，可以引起肺腫瘤、淋巴癌、肝癌、皮膚癌等。它是發(fā)酵食物和酒精飲品在發(fā)酵或貯存過程中天然產(chǎn)生的污染物。2007年，世界衛(wèi)生組織的國際癌癥研究機構(gòu)( IARC) 正式將氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 歸為2A類致癌物。因此對相關(guān)食品中進行氨基甲酸乙酯的檢測和監(jiān)測是非常必要的。

一、試劑和材料

標準溶液配制

1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯貯備液：準確稱取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯標準品，用甲醇定容至10 mL。

2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：準確吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯標準貯備液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。

1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯貯備液：準確稱取0.5000 g氨基甲酸乙酯標準品，用甲醇定容至50 mL。

分別準確吸取一定量氨基甲酸乙酯標準，加100 μL 2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的標準使用液（內(nèi)含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）

固相萃取柱：Cleanert EC氨基甲酸乙酯專用固相萃取柱（堿性硅藻土）

氣相色譜柱：DA-INNOWAX柱

二、實驗方法

樣品前處理

準確量取 2.00 ml 酒樣（注：啤酒樣品EC含量較低，取4 mL樣品上樣），加 100 μL 2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯內(nèi)標使用液、氯化鈉 0.3 g（白酒、醬油不加），超聲溶解、混勻，然后加樣到氨基甲酸乙酯上，抽真空，讓試樣慢慢滲入到Cleanert EC氨基甲酸乙酯專用固相萃取柱中，靜置約 10 min，先用 10 mL 正己烷淋洗除雜，然后用 15 mL 5%乙酸乙酯/乙醚溶液以1 mL/min 流速洗脫并收集于10 mL 具塞刻度試管中，在室溫下用氮氣緩緩吹至0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成測定液供GC/MS分析，同時做空白。

GC-MS條件

色譜柱：DA-INNOWAX柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；

進樣口溫度：220℃；柱溫：初溫 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；

載氣：氦氣，純度≥99.999％

流速：1 mL/min；

電離方式：EI源。

離子源溫度：230℃；

進樣方式：不分流進樣；

樣量：1-2μL；

氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測離子（m/z）： 62、76、89；定量離子62；

D5-氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測離子（m/z）64、76；定量離子64

三、實驗結(jié)果

色譜圖

圖1 氨基甲酸乙酯及內(nèi)標總離子圖

圖2 氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖

3 內(nèi)標 D5-氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖

標準曲線

酒樣加標的回收率及精密度

方法檢出限

當試樣取2.00g時，本方法氨基甲酸乙酯檢出限為2.0μg/kg，定量限為5.0μg/kg。

四、結(jié)論

本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯專用固相柱（堿性硅藻土）前處理結(jié)合DA-INNOWAX柱進行白酒中氨基甲酸乙酯的測定，結(jié)果表明氨基甲酸乙酯檢出限為2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，完全滿足食品安全國家標準GB5009.223-2014方法的檢測要求。

五、訂貨信息

方法二、液相方法-熒光檢測法

一、原理

在鹽酸中，氨基甲酸乙酯與9-羥基噸反應(yīng)，生成具有熒光特性的衍生物，經(jīng)色譜柱分離，熒光檢測器檢測，外標法定量

二、衍生方法

量取0.02mol/L的9-羥基噸500μL添加到1ml酒精度調(diào)整至40%的樣品或標樣中，然后加入100μL的1.5mol/L HCl中，混勻使反應(yīng)完全，放暗處衍生至少60min，過0.45μm濾膜，待測。

三、樣品前處理方法：同上

四、色譜條件

色譜柱：Venusil MP C18，4.6 mm*250 mm，5 μm（P/N：VA952505-0）

流速：0.8 mL/min

柱溫：30℃

激發(fā)波長：233 nm

發(fā)射波長：600 nm

流動相：A：0.02M乙酸鈉（pH=7.2），B：乙腈，梯度程序如下

注意事項：

衍生試劑配置完成后，應(yīng)4℃避光保存（有效期1個月）

在加樣時，盡量縮短操作時間，避免衍生試劑見光時間過長分解

該衍生反應(yīng)需要在暗處進行

衍生時間不得少于30min

流動相pH值要調(diào)整準確

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