日本同仁化學(xué)細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　

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細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　FerroOrange

04 細(xì)胞內(nèi)蛍光プローブ

FerroOrange

細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　

  • 細(xì)胞內(nèi)蛍光プローブ

細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬

  • 製品コード
    F374　 FerroOrange
  • CAS番號(hào)
    –
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 tube ￥14,600 342-09533
3 tubes ￥33,000 346-09531

※ 1 tube當(dāng)たり24 μgのFerroOrangeが含まれます。

  • 細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　
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マニュアル

  • 取扱説明書 細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　 日本語
    細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　
  • 取扱説明書 細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　 English
    細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　

技術(shù)情報(bào)

鉄検出試薬の選択

鉄検出時(shí)の実験方法および測(cè)定機(jī)器に応じて試薬を選択頂けます。

  FerroOrange Mito-FerroGreen
細(xì)胞內(nèi)の局在 細(xì)胞內(nèi) ミトコンドリア
蛍光特性 λex : 543 nm、λem : 580 nm λex : 505 nm、λem : 535 nm
対応裝置
（フィルター）		 蛍光顕微鏡、プレートリーダー （Cy3） 蛍光顕微鏡 （FITC、GFP）
測(cè)定対象 生細(xì)胞 生細(xì)胞
染色回?cái)?shù) 24 μgで35 mm dish 17枚分染色可能
（終濃度 1 μmol/l使用時(shí)）		 50 μgで35 mm dish 5枚分染色可能
（終濃度 5 μmol/l使用時(shí)）

技術(shù)や使用製品に関する補(bǔ)足

【注目の研究?トピック】

 

Dojin News No.162

地球上の生命體の活動(dòng)や疾患における鉄の重要性の再認(rèn)識(shí)　(名古屋大學(xué)　豊國 伸哉 先生)

 

Dojin News No.172

二重機(jī)能性蛍光色素（H-V）を用いたフェロトーシスの解明

 

 

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高感度だから內(nèi)在性の鉄も検出できる

HeLa細(xì)胞を用いて、細(xì)胞內(nèi)に內(nèi)在するFe2+および鉄キレート試薬Bpy（2,2‘-bipyridine、終濃度：100 μmol/l）と鉄（硫酸アンモニウム鉄（II） 、終濃度：100 μmol/l）の添加有無により、細(xì)胞內(nèi)のFe2+の変化をFerroOrangeにより確認(rèn)しました。

蛍光顕微鏡によるイメージング
鉄キレート試薬を添加することで無刺激の細(xì)胞に比べ蛍光強(qiáng)度が低下したことから、細(xì)胞內(nèi)には內(nèi)在性のFe2+が存在することが確認(rèn)できました。

細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　

＜検出條件＞　Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm　　　　　　スケールバー：20 μm

 

プレートアッセイにより簡便に數(shù)値化
鉄キレート試薬および鉄の添加による細(xì)胞內(nèi)のFe2+量の変化を數(shù)値データとして確認(rèn)できました。

細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　

＜検出條件＞　Ex: 543 nm、Em: 580 nm

*操作の詳細(xì)は　よくある質(zhì)問「プレートリーダーでの測(cè)定方法を教えてください。」をご參照ください。

技術(shù)や使用製品に関する補(bǔ)足

ーフェロトーシス研究ー

 

実験例 : アミノ酸トランスポーター（xCT）阻害　

細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　

 

【関連試薬】

?過酸化脂質(zhì)検出試薬

(Liperfluo)

 

?グルタミン酸測(cè)定キット

(Glutamate Assay Kit-WST)

 

?グルタチオン測(cè)定キット

(GSSG/GSH Quantification Kit)

參考文獻(xiàn)

參考文獻(xiàn)を表示する

 

文獻(xiàn)No. 対象サンプル 裝置    引用（リンク）
1) 細(xì)胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡 K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, "MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.", Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.
2) 細(xì)胞
（ヒト內(nèi)皮細(xì)胞株）		 蛍光顕微鏡 Y. Wang and M. Tang, "PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance", Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
3) 細(xì)胞
（MCF7-ADR）		 蛍光顕微鏡 S Guo, X Yao, Q Jiang, K Wang, Y Zhang, H. Peng, J. Tang and W. Yang , "Dihydroartemisinin-Loaded Magnetic Nanoparticles for Enhanced Chemodynamic Therapy", Front Pharmacol , 2020, 11, 226.
4) 細(xì)胞
（293T)		 蛍光顕微鏡 R. A. Weber, F. S. Yen, S.P.V. Nicholson, H. Alwaaseem, E.C. Bayraktar,M. Alam, R. C. Timson, K. La, M. Abu-Remaileh, H. Molina and K. Birsoy, "Maintaining Iron Homeostasis Is the Key Role of Lysosomal Acidity for Cell Proliferation", Mol. Cell, 2020, 77, 1-11.
5) 細(xì)胞
（SK-HEP-1)		 蛍光顕微鏡
（解析ソフトを使用し數(shù)値化)		 X. Li, T. Wang, X. Huang, Y. Li, T. Sun, S. Zang, K. Guan, Y. Xiong, J. Liu and H. Yuan , "Targeting ferroptosis alleviates methionine‐choline deficient (MCD)‐diet induced NASH by suppressing liver lipotoxicity", Liver Int., 2020,  doi:10.1111/liv.14428.
6) 細(xì)胞
（HepG2）

蛍光顕微鏡
マイクロプレートリーダー
イメージングサイトメーター

T. Hirayama, M. Niwa, S. Hirosawa and H. Nagasawa, "High-Throughput Screening for the Discovery of Iron Homeostasis Modulators Using an Extremely Sensitive Fluorescent Probe", ACS Sens., 2020,doi: 10.1021/acssensors.0c01445.
※論文で「RhoNox-4」と記載されている化合物が「FerroOrange」となります。

よくある質(zhì)問

Q

FerroOrangeで染色する時(shí)の注意點(diǎn)を教えて下さい。

A

染色時(shí)は下記の點(diǎn)に注意の上、使用してください。

①FerroOrange染色後の培地交換
培地交換によりFerroOrangeが細(xì)胞外へ漏れ出てしまうため、染色後はそのまま観察してください。

②コントロール実験
鉄検出の実験條件を確認(rèn)するため、鉄キレート試薬Bpy(2,2‘-bipyridine)または鉄（硫酸アンモニウム鉄(II) ）を添加したサンプルを準(zhǔn)備し、FerroOrangeの蛍光強(qiáng)度の変化をみられることをお?jiǎng)幛幛筏蓼埂?/p>

③細(xì)胞が染色されにくい（感度が低い）時(shí)の対応
細(xì)胞種によって染色度合いに差がみられる場(chǎng)合があります。
FerroOrange working solution濃度を推奨の1 μmol/lより高くして染色を行ってください。1-5 μmol/lの範(fàn)囲での染色をお?jiǎng)幛幛筏蓼埂?/p>

Q

プレートリーダーでの測(cè)定方法を教えてください。

A

下記の実験例を參考に測(cè)定ください。

＜測(cè)定サンプル＞
サンプルA：添加剤なし（HeLa細(xì)胞のみ）
サンプルB：鉄キレート試薬 2,2'-bipyridyl (Bpy) を添加したHeLa細(xì)胞
サンプルC：鉄（硫酸アンモニウム鉄）を添加したHeLa細(xì)胞

＜測(cè)定操作＞
1. 96ウェルマイクロブラックプレート（透明底）にHeLa細(xì)胞懸濁液100 μlを 10,000 cells/wellになるよう播種し、37℃インキュベータ（5% CO2）で一晩培養(yǎng)した。
2. サンプルCの細(xì)胞をMEM（FBS不含） 100 μlで3回洗浄した。
3. サンプルCのウェルに硫酸アンモニウム鉄(II)/MEM（FBS不含）溶液 100 μL(終濃度：100 μmol/l)を添加し、37℃インキュベーター（5% CO2）中で30分間靜置した。
4. 全てのウェルの細(xì)胞をHBSS 100 μlで3回洗浄した。
5. サンプルAおよびCのウェルに1 μmol/l FerroOrange working solution 100 μlを添加し、サンプルBのウェルにFerroOrange (終濃度：1 μmol/l)及び Bpy (終濃度：100 μmol/l)を含むHBSS溶液 100 μlを添加し、37℃インキュベータ（5% CO2）で30分間インキュベートした。
6. プレートリーダーにて各サンプルの蛍光強(qiáng)度（Ex: 543 nm、Em: 580 nm）を検出した。

 

＜測(cè)定データ＞
細(xì)胞內(nèi)鉄イオン測(cè)定試薬 FerroOrange　

Q

推奨のフィルターを教えてください。

A

検出時(shí)の推奨フィルターは下記の通りです。
勵(lì)起フィルター: 530-565 nm
蛍光フィルター: 570-620 nm

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取扱條件

規(guī)格
性狀： 本品はアセトニトリル、メタノール、ジメチルスルホキシドに溶解する。
純度(HPLC)： 92.0％ 以上
蛍光スペクトル： 試験適合
取扱條件
1.保存方法：冷蔵,遮光
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