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–Cellstain®– CFSE
–Cellstain®– CFSE
- 細(xì)胞染色用色素
生細(xì)胞染色用色素
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製品コードC375 –Cellstain®– CFSE
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CAS番號(hào)150347-59-4
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化學(xué)名5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate
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分子式?分子量C29H19NO11=557.46
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 1 mg | ￥5,600 | 341-07401 |
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マニュアル
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プロトコル
細(xì)胞を染色したい 
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パンフレット 細(xì)胞増殖測(cè)定細(xì)胞染色プロトコル
參考文獻(xiàn)
1) M. Bronner-Fraser, "Alterations in Neural Crest Migration by a Monoclonal Antibody That Affects Cell Adhesion", J. Cell Biol., 1985, 101, 610.
2) A. Nose and M. Takeichi, "A Novel Cadherin Cell Adhesion Molecule:Its Expression Patterns Associated WithImplantation and Organogenesis of Mouse Embryos", J. Cell Biol., 1986, 103, 2649.
3) S. A. Weston and C. R. Parish, "New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy", J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.
4) C. K. Raymond, P. J. O'hara, G. Eichinger, J. H. Rothman and T. H. Stevens, "Molecular Analysis of the Yeast VPS3 Gene and the Role of Its Product in Vacuolar Protein Sorting and Vacuolar Segregation during the Cell Cycle", J. Cell Biol., 1990, 111, 877.
5) G. Radcliff, R. Waite, J. Lefevre, M. D. Poulik and D. M. Callewaert, "Quantification of Effector/Target Conjugation Involving Natural Killer(NK) or Lymphokine Activated Killer(LAK) Cells by Two-color Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 1991, 139, 281.
6) S. A. Weston and C. R. Parish, "Calcein: a Novel Marker for Lymphocytes Which Enter Lymph Nodes", Cytometry, 1992, 13, 739.
7) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, "Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function", J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.
よくある質(zhì)問(wèn)
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Q
細(xì)胞染色色素の勵(lì)起と蛍光の波長(zhǎng)を教えて下さい。
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A
＊AOはフローサイトメトリーなどでは488nm勵(lì)起で観察されることもあります
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Q
細(xì)胞染色試薬Cellstainの生細(xì)胞染色色素の中で細(xì)胞內(nèi)に長(zhǎng)く留まるのはどれですか？
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A
細(xì)胞內(nèi)の保持という意味ではやはり「CFSE」が一番細(xì)胞の中に長(zhǎng)くとどまることが出來(lái)ます。
蛍光強(qiáng)度は落ちますが、8週間細(xì)胞の中に蛍光色素があったのが確認(rèn)されております。
「Calcein-AM」「BCECF-AM」で3日間蛍光が観察されております。
「Calcein-AM」は6時(shí)間で90％細(xì)胞內(nèi)に保持されているとの報(bào)告もございます。
?S.A.Weston, et.al., J.Immunol.Methods, 133, 87-97(1990)
?H.P.Zhong, et.al., Hum.Immunol., 37, 264-270(1993)ただ、細(xì)胞障害活性ということでは「Calcein-AM」「BCECF-AM」の方が影響を及ぼさない
といわれております。
?L.S.D.Clerck, et.al., J.Immunol.Methods, 172, 115-124(1994)あと注意點(diǎn)としては、元々の基本骨格がF(xiàn)luoresceinなので、勵(lì)起光による退光が
起りやすいので長(zhǎng)時(shí)間の勵(lì)起による蛍光観察は難しいかもしれません。
（退光防止剤などを使用すれば幾分よいかもしれませんが）
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Q
CFSEの使用方法を教えて下さい。
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A
參考例として紹介します。
文獻(xiàn)[1]中の記述を、以下に示します。
生後7-10週のCBA/Hマウスを殺し、脾臓（または、目的とする他臓器）を切除し、F15培地（1%FCS）に浸す。
その後、金屬製の網(wǎng)を通して細(xì)胞懸濁液を得、遠(yuǎn)心分離によって赤血球や死細(xì)胞等を除去する。
その精製リンパ球をpH 7.0のPBSに懸濁し、50,000,000 cells/mLとする。
5.0μM濃度のCFSEを加え、37℃で15分間標(biāo)識(shí)する。氷冷したF15培地（1% FCS）に懸濁させて遠(yuǎn)心機(jī)にかけ
（350g、5分、20℃）ることで、2回洗浄する。F15培地に懸濁する。
CBA/Hマウスに、靜脈注射する。一定時(shí)間後、マウスを殺し脾臓（または、目的とする他臓器）を
切除してリンパ球を単離し、flow cytometryで解析する。文獻(xiàn)[2]は、Calcein-AMに関するものですが、[1]と同様の手技によって、CFSEとの比較も行っています。
【參考文獻(xiàn)】
1. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, J. Immunol. Methods, 133, 87 (1990).
2. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, Cytometry, 13, 739 (1992).
取扱條件
| 性狀： | 本品は、無(wú)色～微黃色固體でジメチルスルホキシド及びアセトニトリルに溶ける。 |
|---|---|
| ジメチルスルホキシド溶狀： | 試験適合 |
| NMRスペクトル： | 試験適合 |
| 1.保存方法：冷凍 |
