日本同仁化學(xué)抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit – NH2　

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抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　Biotin Labeling Kit – NH2

08 ラベル化剤

Biotin Labeling Kit – NH2

抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　

  • ラベル化剤
  • 細(xì)胞機(jī)能解析
  • 50-200?
  • NH2

抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット

  • 初めてビオチン標(biāo)識(shí)をする
  • 感度をあげたい
  • 蛍光色素でうまくいかなかった
  • 製品コード
    LK03　 Biotin Labeling Kit – NH2
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
3 samples ￥13,600 347-90891
サンプル量 50-200 µg
所要時(shí)間 2時(shí)間
標(biāo)識(shí)部位 -NH2
検出方法 顕微鏡?FCM?ウエスタンブロット?プレートリーダー

?NH2-Reactive Biotinと標(biāo)的タンパク質(zhì)を混合するだけで、安定な共有結(jié)合を形成する。

?Filtraiton Tubeを用いた分離操作により高い回収率で標(biāo)識(shí)體が得られる。

?キット付屬の保存溶液でビオチン標(biāo)識(shí)體の保存ができる。
キット內(nèi)容
3 samples ?NH2-Reactive Biotin
?WS Buffer
?Reaction Buffer
?Filtration Tube		 3 tubes
4 ml x1
500 μl x1
3 tubes

  • 抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　
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マニュアル

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    抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　
  • 取扱説明書 抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　 English
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Biotin Labeling Kit – NH2の使い方

技術(shù)情報(bào)

特徴

1) 約2時(shí)間でビオチン標(biāo)識(shí)體が調(diào)製できる。
2) NH2-Reactive Biotinと標(biāo)的タンパク質(zhì)を混合するだけで、安定な共有結(jié)合を形成する。
3) 分子量50,000以上のタンパク質(zhì)が標(biāo)識(shí)できる。
4) 50～200 μgのタンパク質(zhì)を標(biāo)識(shí)可能である。
5) Filtration Tubeを用いた分離操作により高い回収率で標(biāo)識(shí)體が得られる。
6) キット付屬の保存溶液でビオチン標(biāo)識(shí)體の保存ができる。

參考文獻(xiàn)

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No. 標(biāo)識(shí)対象 ストレプトアビジン  検出裝置    引用（リンク）
1 抗體 POD標(biāo)識(shí)ストレプトアビジン プレートリーダー M. Takahashi, Y. Ishida, D. Iwaki, K. Kanno, T. Suzuki, Y. Endo, Y. Homma and T.  Fujita, "Essential role of Mannose-binding lectin-associated serine protease-1 in activation of the complement factor D", J. Exp. Med.., 2010, 207, （1）, 29.
2 ポリクローナル抗體
（anti-human EBI3）		 POD標(biāo)識(shí)ストレプトアビジン プレートリーダー R. Nishino, A. Takano, H. Oshita, N. Ishikawa, H. Akiyama, H. Ito, H. Nakayama, Y. Miyagi, E. Tsuchiya, N. Kohno, Y. Nakamura and Y. Daigo, "Identification of Epstein-Barr virus–induced gene 3 as a novel serum and tissue biomarker and a therapeutic target for lung cancer", Clin. Cancer Res.., 2011, 17, （19）, 6272.
3 マウスモノクローナル抗體
（MAb 2F4）		 POD標(biāo)識(shí)ストレプトアビジン プレートリーダー M. Tahara, S. Ohno, K. Sakai, Y. Ito, H. Fukuhara, K. Komase, M.A. Brindley, P.A. Rota, R.K. Plemper, K. Maenaka and M. Takeda, "The receptor-binding site of the measles virus hemagglutinin protein itself constitutes a conserved neutralizing epitope", J. Virol.., 2013, 87, （6）, 3583.
4 抗體
（Anti-Nectin-2 mAbs）		 –   –  T. Oshima, S. Sato, J. Kato, Y. Ito, T. Watanabe, I. Tsuji, A. Hori, T. Kurokawa and T. Kokubo, "Nectin-2 is a potential target for antibody therapy of breast and ovarian cancers", Mol. Cancer., 2013, 12, （60）, .
5 マウスIgG抗體（MMG-49） POD/R-PE標(biāo)識(shí)ストレプトアビジン ウエスタンブロッティング,
フローサイトメーター		 D. Men, T.T. Zhang, L.W. Hou, J. Zhou, Z.P. Zhang, Y.Y. Shi, J.L. Zhang, Z.Q. Cui, J.Y. Deng, D.B. Wang and X.E. Zhang, "Self-Assembly of Ferritin Nanoparticles into an Enzyme Nanocomposite with Tunable Size for Ultrasensitive Immunoassay", ACS Nano., 2015, 9, （11）, 10852.
6 IgM抗體
（TR1）		 POD/R-PE標(biāo)識(shí)ストレプトアビジン ウエスタンブロッティング,
フローサイトメーター		 X. Piao, T. Ozawa, H. Hamana, K. Shitaoka, A. Jin, H. Kishi and A. Muraguchi, "TRAIL-receptor 1 IgM antibodies strongly induce apoptosis in human cancer cells in vitro and in vivo", Oncoimmunology., 2016, 5, （5）, e1131380.
7  マウスモノクローナル抗體 （16A11） POD標(biāo)識(shí)ストレプトアビジン プレートリーダー N. Hosen, Y. Matsunaga, K. Hasegawa, H. Matsuno, Y. Nakamura, M. Makita, K. Watanabe, M. Yoshida, K. Satoh, S. Morimoto, F. Fujiki, H. Nakajima, J. Nakata, S. Nishida, A. Tsuboi, Y. Oka, M. Manabe, H. Ichihara, Y. Aoyama, A. Mugitani , T. Nakao, M. Hino, R. Uchibori, K. Ozawa, Y. Baba, S. Terakura, N. Wada, E. Morii, J. Nishimura, K. Takeda, Y. Oji, H. Sugiyama, J. Takagi and A. Kumanogoh, "The activated conformation of integrin β7 is a novel multiple myeloma-specific target for CAR T cell therapy", Nat. Med.., 2017, 23, （12）, 1436.
8 レクチン
（Recombinant BC2LCN ）		 Alexa FluorTM 555標(biāo)識(shí)ストレプトアビジン  蛍光顕微鏡   D. Sugahara, Y. Kobayashi, Y. Akimoto, H. Kawakami, "Mouse intestinal niche cells express a distinct α1,2-fucosylated glycan recognized by a lectin from Burkholderia cenocepacia", Glycobiology., 2017, 27, （3）, 246.
9 モノクローナル抗體
（H1 HA）		 – –  T. Hiono, A. Matsuda, T. Wagatsuma, M. Okamatsu, Y. Sakoda and A. Kuno, "Lectin microarray analyses reveal host cell-specific glycan profiles of the hemagglutinins of influenza A viruses", Virology., 2019, 527, 132.
10 抗體
（lysozyme sdAb, Y52A mutant）		 – プレートリーダー T. Kaya, S. Nagatoishi, K. Nagae, Y. Nakamura and K. Tsumoto, "Highly sensitive biomolecular interaction detection method using optical bound/free separation with grating-coupled surface plasmon field-enhanced fluorescence spectroscopy （GC-SPFS）.", PLoS ONE, 2019, 14, （8）, DOI:10.1371/journal.pone.0220578.
11 タンパク質(zhì)（recombinant human IL-12P40） – プレートリーダー Y. Morita, T. Imai, S. Bamba, K. Takahashi, O. Inatomi, T. Miyazaki, K. Watanabe, S. Nakamura, A. Yoshida, Y. Endo, N. Ohmiya, T. Tsujikawa and A. Andoh, "Clinical relevance of innovative immunoassays for serum ustekinumab and anti-ustekinumab antibody levels in Crohn's disease.", J Gastroenterol Hepatol Res, 2019, DOI:10.1111/jgh.149628.
12 レクチン
（SeviL was isolated from Mytilisepta virgata）		 – – Y. Fujii, M. Gerdol, S.M.A. Kawsar, I. Hasan, F. Spazzali, T. Yoshida, Y. Ogawa, S. Rajia, K. Kamata, Y. Koide, S. Sugawara, M. Hosono, J.R.H.  Tame, H. Fujita, A. Pallavicini and Y. Ozeki, "A GM1b/asialo-GM1 oligosaccharide-binding R-type lectin from purplish bifurcate mussels Mytilisepta virgata and its effect on MAP kinases.", FEBS J., 2019, DOI: 10.1111/febs.15154..
13 モノクローナル抗體（ mAb2H6, mAb10D11）  – – K. Okada, H. Itoh and M. Ikemotob, "Circulating S100A8/A9 is potentially a biomarker that could reflect the severity of experimental colitis in rats', Heliyon, 2020, 6, （2）, e03470.
14 抗體
（CD31）		 – – Y. Yamazaki, M. Shinohara, A. Yamazaki, Y. Ren, Y. W. Asmann, T. Kanekiyo and Guojun Bu, "SApoE （Apolipoprotein E） in Brain Pericytes Regulates Endothelial Function in an Isoform-Dependent Manner by Modulating Basement Membrane Components", Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2020, 40, （1）, 128.

よくある質(zhì)問

Q

Labeling Kitで1次抗體を直接標(biāo)識(shí)する利點(diǎn)を教えてください。

A

はじめて抗體標(biāo)識(shí)をされる方を?qū)澫螭趣筏骏抓恁去偿毪蜃鞒嗓筏皮辘蓼埂?br /> カスタマーサポートの視點(diǎn)から直接標(biāo)識(shí)法の利點(diǎn)や実施例等を記載しておりますので、ご參照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。
「はじめての抗體標(biāo)識(shí)プロトコル　～カスタマーサポートの視點(diǎn)から～」

Q

使用できるIgGの量が少量しかありませんが標(biāo)識(shí)できますか？

A

本キットでは、標(biāo)識(shí)に必要なIgGの量は50～200μgとしています。
この範(fàn)囲であれば性能に大きな違いはありません。

10μgのIgGでも標(biāo)識(shí)可能ですが、バックグランドの上昇などの問題が生じる可能性があります。

Q

サンプル溶液中の共存物は反応に影響しますか？

A

共存物の種類により影響することがあります。
溶液中にどのような物質(zhì)が含まれるかを確認(rèn)の上、狀況に応じてラベル化に用いるサンプルの精製を行い、標(biāo)識(shí)反応にご使用ください。

＜高分子：分子量1萬以上＞
影響する可能性があります。
BSAやゼラチンなどアミノ基をもつ化合物が含まれると、抗體への標(biāo)識(shí)効率が低下します。また、高分子のためFiltration Tubeでも除くことができません。また、アミノ基を持たない化合物でも、高分子の不純物が多いとフィルターの目詰まりの原因になり、標(biāo)識(shí)?精製操作に支障がでる可能性もあります。反応に使用する前に別途除去操作を行ってください。
＊本製品に限らず他のLabeling kit に関しても同様の注意が必要です。

抗體の精製について、小社抗體精製キット（下記）を用いたBSAとゼラチンの除去方法をご紹介いたします。

IgG Purification Kit – A　　　IgG Purification Kit – G

 

【BSAの除去方法】

1)必要な試薬

IgG Purification Kit-A(もしくはG)(Code：AP01もしくはAP02)

市販の抗體 200µg

2)精製方法

IgG Purification Kit添付の取扱説明書に従って、精製を行う。

 

【ゼラチンの除去方法】
A, Bいずれかの方法で除去する。

A.コラーゲナーゼ（Collagenase）によるゼラチン分解

抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　

図1 ゼラチン除去精製前後のSDS-PAGE
1: ゼラチン含有IgG溶液
2: 精製後のIgG溶液

(1) 試薬
?コラーゲナーゼ（Sigma, #C7826） 3.5 CDU/ml 希釈溶液
?IgG Purification Kit-A(もしくはG) (Code: AP01もしくはAP02）
?市販の抗體 200 μg
(2)精製方法
?0.2% ゼラチンを含む200 μg/ml IgG溶液 1 mlに酵素処理用緩衝液 (100 mmol/l HEPES, pH7.4, 0.36 mmol/l CaCl2含有) 420 μlと酵素処理用緩衝液で調(diào)製した 3.5 CDU/ml コラーゲナーゼ希釈溶液 80 μlを加えて混合する。
?37℃、3時(shí)間インキュベートした後、IgG Purification Kit-A(もしくはG)を用いてIgGを単離する。
※IgG Purification Kitでは、抗體を固定化擔(dān)體に保持させる際の抗體溶液量を一回當(dāng)たり200 μlとしている。しかし、上記操作でコラーゲナーゼ処理した抗體溶液量は、約1.5 mlとなるため、IgGを擔(dān)體に保持させる操作を8回（200 μl×7, 100 μl×1）に分けて行う。
※上記の方法で得られる抗體の回収率：45～50%
 

B. 300K 限外ろ過チューブを用いたゼラチン除去

抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　

図2 ゼラチン除去精製前後のSDS-PAGE
1: IgG
2: ゼラチン含有IgG溶液
3: 300K限外濾過のみのIgG溶液
4: 300K限外濾過+ IgG Purification Kit – Gで精製後のIgG溶液

 (1)試薬
?300K フィルトレーションチューブ（Pall社 ナノセップ遠(yuǎn)心ろ過デバイス（製品コード：OD300C33）
?IgG Purification Kit-A(もしくはG) (Code: AP01もしくはAP02）
?市販の抗體 200 μg
(2)精製方法
?0.1% ゼラチンを含む200 μg/ml IgG溶液 1 mlを300K フィルトレーションチューブ 2本に分けて限外ろ過を行う（200 μl×2, 100 μl×1, 13,500 x g）。
?その後、回収溶液500 μlをIgG Purification Kit-A(もしくはG)を用いてIgGを単離する。
※回収溶液500 μlに対し、IgG Purification KitのWashing Buffer 50 μlを添加し、精製を行う。 ゲルへの吸著操作は5回繰り返す。
※上記の方法で得られる抗體の回収率：35～45%

 

Q

低分子のタンパク質(zhì)（分子量50,000以下）に標(biāo)識(shí)する場(chǎng)合の方法を教えて下さい。

A

キット付屬のフィルトレーションチューブは分畫分子量30Kの限外濾過フィルターのため、余裕をもって50,000以上のタンパク質(zhì)のご使用を推奨しております。

分子量50,000以下のタンパク質(zhì)を標(biāo)識(shí)される場(chǎng)合は、下記のような分畫分子量の小さい限外濾過フィルターに変更して頂くことで、低分子のタンパク質(zhì)でもラベル化可能でございます。

——————————————
PALL社　ナノセップ　 3K　製品No.OD003C33
PALL社　ナノセップ　10K　製品No.OD010C33 
——————————————

キット同梱のフィルターを用いた場(chǎng)合に比べ遠(yuǎn)心に時(shí)間を要することがございますので遠(yuǎn)心時(shí)間はご検討下さい。

Q

標(biāo)識(shí)後、フィルトレーションチューブを遠(yuǎn)心してもメンブレン上に液が殘る。

A

（１）メンブレンを目視で確認(rèn)した際、メンブレンカップの淵にうっすら液が殘る程度であれば、次の操作に進(jìn)んで下さい。

メンブレン上に液が殘っていたり、メンブレンカップを傾けて回転させたとき、液が垂れてくるようであれば、さらに遠(yuǎn)心を8,000g で15分～30分程度行って下さい。

（２）1)の遠(yuǎn)心操作後もメンブレン上に液が殘る場(chǎng)合は、標(biāo)識(shí)體が凝集していないか確認(rèn)してください。

 抗體やタンパク質(zhì)自身の性質(zhì)によりますが、低分子標(biāo)識(shí)剤を標(biāo)識(shí)することで抗體やタンパク質(zhì)の疎水性が増し、凝集する場(chǎng)合がございます。

標(biāo)識(shí)體に凝集が見られる場(chǎng)合は、一度別のマイクロチューブに移し、遠(yuǎn)心し上澄みをご使用ください。(抗體?タンパク質(zhì)の回収量は低下いたします。)

上記でも解決しない場(chǎng)合は、小社カスタマーサポートまでお問い合わせください。

※フィルターの目詰まりが疑われる場(chǎng)合は、メンブレンフィルターを新しいものに交換すると解決する場(chǎng)合がございます。 
代替品：　PALL社製　ナノセップ　30K (メーカーコード：OD030C33)

Q

このキットではどのようなものが標(biāo)識(shí)できますか？

A

分子量が「50,000以上」で反応性のアミノ基(NH2)を有している化合物(抗體、蛋白質(zhì)など)であれば標(biāo)識(shí)できます。
量は「50～200μg」が対象となります。

＊『mg』量の標(biāo)識(shí)をお考えの際には「Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)；同仁品コード：BK01」もございます。

＊キットに添付しているFiltration Tubeのサイズが30Kのため、低分子の化合物は精製できません。

Q

IgG １分子に対して、どれくらいのBiotinが標(biāo)識(shí)されますか？

A

IgG １分子に対して平均7～10個(gè)のBiotinが標(biāo)識(shí)されます。

抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　 抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　

取扱條件

取扱條件
1.保存方法：冷蔵, 2.吸濕注意
SDSダウンロード
抗體?タンパク質(zhì)標(biāo)識(shí)キット Biotin Labeling Kit - NH2　

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