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ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
- ラベル化剤
エクソソーム 膜蛍光染色キット Green
- 細(xì)胞外で凝集せず、より正確な動(dòng)態(tài)を観察できる
- 本キットだけで蛍光標(biāo)識(shí)から精製まで可能
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製品コードEX01 ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 samples※ | ￥25,000 | 343-09661 |
※ 精製済エクソソーム（超遠(yuǎn)心法）として、タンパク質(zhì)：1-10 µg/sample、粒子數(shù)：10-100×108個(gè)/sample
| 5 samples※ | ?Mem Dye-Green ?Filtration tube |
×1 ×5 |
|---|
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マニュアル
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取扱説明書
日本語 
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取扱説明書 English
技術(shù)情報(bào)
より正確にエクソソームの動(dòng)態(tài)を観察する
エクソソームの膜を染色するためによく用いられている膜染色色素（S 社 製品P）には、色素自體が凝集を起こし、エクソソームに由來しない蛍光起點(diǎn)が生じたり、エクソソームの性質(zhì)変化やバックグラウンドの上昇などを招く課題が挙げられています1), 2)。
ExoSparkler シリーズで用いている色素（Mem Dye-Green, Red, Deep Red）は凝集を起こさず、エクソソームの性質(zhì)にもほとんど影響を及ぼさないため、より正確にエクソソームの動(dòng)態(tài)を観察することが可能です。
| 參考文獻(xiàn) | |
| 1) | Mehdi Dehghani et al., “Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028. |
| 2) | Pu?ar Dominkuš P et al., “PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.” Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013. |
技術(shù)や使用製品に関する補(bǔ)足
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技術(shù)情報(bào)のデータは京都大學(xué)大學(xué)院工學(xué)研究科高分子化學(xué)専攻 秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。 |
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細(xì)胞外小胞、エクソソームの特性と機(jī)能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執(zhí)筆いただいた記事を掲載しています。
參考文獻(xiàn)
1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, doi:10.1016/j.tox.2020.152544.
2) Y. Nakao, T. Fukuda, Q. Zhang, T. Sanui, T. Shinjo, X. Kou, C. Chen, D. Liu, Y. Watanabe, C. Hayashi, H. Yamato, K. Yotsumoto, U. Tanaka, T. Taketomi, T. Uchiumi, A. D. Le, S. Shi, F. Nishiura, "Exosomes from TNF-α-treated human gingiva-derived MSCs enhance M2 macrophage polarization and inhibit periodontal bone loss", Acta Biomater., 2020, doi:10.1016/j.actbio.2020.12.046.
よくある質(zhì)問
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Q
推奨されるエクソソームの精製法はありますか？
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A
超遠(yuǎn)心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、殘存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。
1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。
2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細(xì)胞取り込みアッセイに標(biāo)識(shí)エクソソームを使用する場合、細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)が変化する恐れがございます。
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Q
標(biāo)識(shí)後の精製操作でフィルターは著色していますが、未反応の色素は分離できていますか？
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A
未反応の色素はフィルターに保持されるために著色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認(rèn)しております。
＜実験條件＞
超遠(yuǎn)心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質(zhì)量として10µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細(xì)胞(1.25×104 cells)に添加して、4時(shí)間後の蛍光畫像を観察しました。結(jié)果として、バッファーのみで得られた回収物は細(xì)胞へ添加しても蛍光輝點(diǎn)が観察されず、回収物に未反応の色素が殘っていないことを確認(rèn)しました。
①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合
細(xì)胞へ添加後(4h)の蛍光畫像
②バッファーのみをキットで処理した場合
細(xì)胞へ添加後(4h)の蛍光畫像
■ 検出條件
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
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Q
染色後のエクソソームは保存できますか？
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A
染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。
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Q
エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。
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A
小社では染色後のエクソソームを用いた細(xì)胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお?jiǎng)幛幛扦蓼护蟆?/p>
取扱條件
| 1.保存條件:冷蔵,遮光 |
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エクソソーム タンパク質(zhì)蛍光染色キット Green
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