Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

01 細(xì)胞増殖/細(xì)胞毒性測(cè)定用試薬

Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

• 細(xì)胞増殖/細(xì)胞毒性測(cè)定用試薬
• ミトコンドリア関連
• 細(xì)胞內(nèi)代謝

解糖系/酸化的リン酸化測(cè)定キット

• プレートリーダーを使用するため、高額な裝置購(gòu)入が不要
• 必要試薬は全て入ったAll in Oneのキット形態(tài)
• 実験操作の流れが解る詳細(xì)なプロトコル

• 製品コード
  G270　 Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

<使用回?cái)?shù)の目安>
使用回?cái)?shù)は、行う実験の種類や検討方法によって異なります。
詳細(xì)は、よくある質(zhì)問「1キットあたり測(cè)定可能なサンプル數(shù)を教えて下さい?！工颏创_認(rèn)ください。

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マニュアル

Q

1キットあたり測(cè)定可能なサンプル數(shù)を教えて下さい。

A

 

サンプルの測(cè)定をそれぞれn=3で行った場(chǎng)合、下記表に記載のサンプル數(shù)を測(cè)定頂けます。

	50 tests
	Lactate Assay			ATP Assay
	解糖能評(píng)価	代謝シフト評(píng)価	代謝経路依存性 評(píng)価	解糖能評(píng)価	代謝シフト評(píng)価	代謝経路依存性 評(píng)価
96 well プレート	48 well分		48 well分		48 well分	48 well分
測(cè)定可能なサンプル數(shù) （n=3で行った場(chǎng)合）	6 サンプル		4 サンプル		8 サンプル	5 サンプル

※予備実験を行わない場(chǎng)合の最大測(cè)定可能サンプル數(shù)を記載しています。
※Lactate Assayを行う際、培地に血清を含む場(chǎng)合、バックグラウンドコントロールとして、使用した血清入り培地のみの測(cè)定試料を準(zhǔn)備することをお?jiǎng)幛幛筏蓼埂?/p>

 

	50 tests
	Lactate Assay			ATP Assay
	解糖能評(píng)価	代謝シフト評(píng)価	代謝経路依存性 評(píng)価	解糖能評(píng)価	代謝シフト評(píng)価	代謝経路依存性 評(píng)価
96 well プレート	9 well分		9 well分		21 well分	9 well分
測(cè)定可能なサンプル數(shù) （n=3で行った場(chǎng)合）	5 サンプル		4 サンプル		4 サンプル	4 サンプル

※予備実験を行った場(chǎng)合の最大測(cè)定可能サンプル數(shù)を記載しています。
※Lactate Assayを行う際、培地に血清を含む場(chǎng)合、バックグラウンドコントロールとして、使用した血清入り培地のみの測(cè)定試料を準(zhǔn)備することをお?jiǎng)幛幛筏蓼埂?/p>

 

 

解糖能評(píng)価(Lactate Assay)のプレートレイアウト例(n=3)
(左:予備実験無し、右:予備実験あり)

代謝シフト評(píng)価(ATP Assay)のプレートレイアウト例(n=3)
(左:予備実験無し、右:予備実験あり)

代謝経路依存性評(píng)価のプレートレイアウト例(n=3)
(左:ATP Assay、右:Lactate Assay)(予備実験なし)

代謝経路依存性評(píng)価のプレートレイアウト例(n=3)
(左:ATP Assay、右:Lactate Assay)(予備実験あり)

Q

解糖能の評(píng)価において、検出されたサンプルの吸光度の値が培地のみ(blank)の吸光度と変わりません。原因と解決策を教えて下さい。

A

原因として、細(xì)胞から放出される乳酸量が少ないことが考えられます。播種する細(xì)胞數(shù)を増やし、インキュベート時(shí)間をさらに延ばしてください(3時(shí)間⇒5時(shí)間)。

Q

それぞれの評(píng)価において、ノーマライズは必要になりますか。また、ノーマライズする場(chǎng)合の方法を教えて下さい。

A

Oligomycinおよび2-DG処理5時(shí)間では、タンパク量によるノーマライズ前後での結(jié)果はほとんど変わらないことを確認(rèn)しております。ただし、細(xì)胞の刺激に使用する薬剤処理等により、細(xì)胞數(shù)やタンパク量に大きな変化が無いことを予め確認(rèn)してから本キットでの評(píng)価を行って下さい。

タンパク量でノーマライズする場(chǎng)合は、以下に示す図を參照下さい。
※タンパク量でノーマライズする場(chǎng)合、ATP Assayに使用する試薬の組成上、ATP AssayやLactate Assayに用いた同一細(xì)胞サンプルでの評(píng)価ができません。そのため、タンパク定量用に別途細(xì)胞サンプルをご準(zhǔn)備下さい。

Q

Lactate Assayは450 nm以外の吸収フィルターで測(cè)定できますか。

A

450 nm以外では、490 nmのフィルターでの使用が可能です。ただし、吸光度値は450 nmで測(cè)定した場(chǎng)合と比較し低くなります。

Q

還元物質(zhì)を含むサンプルは測(cè)定できますか。

A

サンプル中に還元性を持つ物質(zhì)が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なlactateの変化が測(cè)定できません。培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場(chǎng)合、バックグラウンドコントロールとして「細(xì)胞を含まない培地＋薬剤のみ」の試薬ブランクを一緒に測(cè)定して下さい。

Q

Working solutionはどのくらい安定ですか。

A

Working solutionは保存できません。用時(shí)調(diào)製して下さい。また、光に不安定であるため、調(diào)製後は遮光して下さい。遮光下室溫で4時(shí)間安定です。

Q

発光シグナルはどの程度安定ですか。

A

発光シグナルは3時(shí)間安定です。ただし、溫度と光が発光に影響しますので、すぐに測(cè)定できない場(chǎng)合は、遮光し溫度を一定(25℃付近)に保てる場(chǎng)所で靜置して下さい。

Q

測(cè)定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか。

A

測(cè)定はできますが、ブラックプレートや透明プレートを用いた場(chǎng)合、発光強(qiáng)度が下がります。また、透明プレートの場(chǎng)合、ブランクが高くなりますので、白色プレートを推奨しております。

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