Spy-LHP

02 酸化ストレス関連試薬

Spy-LHP

• 酸化ストレス関連試薬

過酸化脂質(zhì)検出試薬

• 製品コード
  S343　 Spy-LHP
• CAS番號
  892396-71-3
• 化學(xué)名
  2-(4-Diphenylphosphanylphenyl)-9-(1-hexylheptyl)anthra[2,1,9-def,6,5,10-d’e’f’]diisoquinoline-1,3,8,10-tetraone
• 分子式?分子量
  C₅₅H₄₉N₂O₄P=832.96

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Q

Spy-LHPの使用例を教えてください

A

チラコイド膜に埋め込まれているタンパク質(zhì)複合體『PSⅡ（光科學(xué)系Ⅱ）』の過酸化脂質(zhì)測定例を紹介致します。
この方法は次の文獻を參考にしております。

真野純一, Sergey Khorobrykh, 尼子克己, "1.代謝産物量の定量 d.活性酸素種,抗酸化物", 低溫科學(xué), 2009, 67, 179.

1.用意するもの

(1)Spy-LHP測定溶液：1 mmol/L Spy-LHPになるようアセトンにて溶解し、さらにエタノールで2.7 mmol/Lになるよう希釈する。

※Spy-LHPは酸化されやすいため、溶解、希釈に用いるアセトンとエタノールはあらかじめ窒素バブリング等により溶存酸素量を減らしてご使用ください。またSpy-LHP溶液は用時調(diào)製にてご使用ください?！粶y定あたり2.7 mL使用

(2)標(biāo)準(zhǔn)LOOH(検量線作成用)：25-250 nmol/L m-chloroperbenzoic acid

2.PSⅡ膜標(biāo)品が50 μg Chl/mLの濃度となるように50 mmol/lLMES-NaOH(pH6.0), 35 mol/l NaClに懸濁する。

3.光照射し、継時的に0.3 mlをとり、Spy-LHP測定溶液2.7 mLと混合する（5 μg Chl/mL）。

4.暗所で30分靜置後、遠心（18,000 ×g, 5 min）により膜畫分を除き、上清を勵起光524 nmで、535-537 nmの蛍光を測定する。

5.検量線および消光補正は次のように行う。

標(biāo)準(zhǔn)LOOH(各濃度)に、PSⅡ膜標(biāo)品を加えたもの（＋PSⅡ）と加えないもの（－PSⅡ）を調(diào)製する。光照射せずに0.3 mLをSpy-LHP測定溶液2.7 mLと混合、靜置、遠心し、上清を得る。

＋PSⅡ,－PSⅡ試料それぞれの標(biāo)準(zhǔn)LOOH濃度ゼロの蛍光強度をa1、 a2、それぞれの検量線の傾きをb1、b2とする。クエンチング係數(shù)はb1/b2であり、光照射後の試料の蛍光強度Xが得られたなら、それに対応するLOOH濃度は(X－a1)×b2/b1 となる。

また、光照射前に含まれるLOOH濃度は、(a1－a2)×b2/b1となる。