抑制細(xì)胞外囊泡對實(shí)驗耗材的吸附

EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡封閉試劑

 

　　本品是抑制細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞外囊泡吸附于樣本管或移液槍頭等實(shí)驗耗材的聚合物試劑。能防止實(shí)驗和保存時細(xì)胞外囊泡吸附所引起的損耗，提高回收率。本品可在細(xì)胞外囊泡（含外泌體）的超濾、提取和保存前使用。

　　使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（產(chǎn)品編號299-77603, 293-77601）從細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取外泌體時，搭配本品效果更佳。

 

◆使用前提示

●　在血清、血漿或雜質(zhì)較多的樣本中，本品的使用效果會受到影響。

●　本品含有聚合物。若擔(dān)心聚合物會影響后續(xù)實(shí)驗的結(jié)果，請不要使用本品。

 

◆特點(diǎn)

●　抑制培養(yǎng)上清中或提取后細(xì)胞外囊泡對實(shí)驗耗材的吸附

●　用法簡單，只需往樣本中添加本品即可

 

◆EV-Save™ 的吸附抑制效果~樣本管~

下面來驗證一下，使用EV-Save™ 是否能抑制提取外囊泡對試管的吸附。

 

■實(shí)驗條件

　　用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（產(chǎn)品編號：293-77601）從COLO201細(xì)胞的培養(yǎng)上清中提取出外泌體。

　　將3 ng/μL外泌體放入試管中靜置3分鐘。然后用移液器轉(zhuǎn)移到其他樣本管，重復(fù)本步驟4次以上。

　　在含EV-Save™ 的實(shí)驗組中，將EV-Save™ 按照1/100體積添加到樣本中，然后進(jìn)行移液。

　　使用PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）（產(chǎn)品編號：297-79201）對外泌體的CD63信號進(jìn)行定量，驗證移液次數(shù)與外泌體減少比率的關(guān)系。

　　將移液前的CD63信號設(shè)定為100%，相對值見圖表。

【結(jié)果】

在普通樣本管和低蛋白吸附樣本管中，移液操作都會引起外泌體減少。而添加EV-Save™ 幾乎能完全抑制移液引起的外泌體損耗。

 

◆EV-Save™ 的吸附抑制效果~同時使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS~

下面，在利用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS從TIG3細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取外泌體的過程中，驗證添加EV-Save™ 是否能抑制外泌體的損耗。

 

■實(shí)驗條件

　　使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS，分別從1mL COLO201、TIG3和人iPS細(xì)胞的培養(yǎng)上清中提取外泌體，培養(yǎng)上清沒有經(jīng)過超濾濃縮。

　　提取外泌體時分別進(jìn)行了以下兩項操作，"往各個培養(yǎng)上清中添加/不添加EV-Save™"，"往MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附帶的'Exosome Elution Buffer'中添加/不添加EV-Save™"。

　　使用PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）（產(chǎn)品編號： 297-79201）對外泌體的CD63信號進(jìn)行定量，并將其信號強(qiáng)度作為反應(yīng)為外泌體量的標(biāo)記。

　　假設(shè)移液前的CD63信號為100%，相對值見圖表。

－/－: 培養(yǎng)上清沒有添加EV-Save™/ "Exosome Elution Buffer"沒有添加EV-Save™

－/＋: 培養(yǎng)上清沒有添加EV-Save™/ "Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™

＋/＋: 培養(yǎng)上清添加了EV-Save™/ "Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™

 

【結(jié)果】

添加了EV-Save™ 的TIG3的細(xì)胞培養(yǎng)上清及MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附帶的"Exosome Elution Buffer"實(shí)驗組，比兩者都沒添加的實(shí)驗組，外泌體的回收量增加了大約20%。

 

◆超濾時EV-Save™的吸附抑制效果~人iPS細(xì)胞~

接下來驗證人iPS細(xì)胞培養(yǎng)上清在進(jìn)行超濾（Vivaspin 20，100K）濃縮前后，是否有發(fā)生外泌體損耗。

超濾后，培養(yǎng)上清中的外泌體會損耗大約60%，但添加EV-Save™ 后，幾乎能完全抑制超濾引起的外泌體損耗。

 

◆EV-Save™ 對細(xì)胞的毒性評估~人iPS細(xì)胞~

接著，使用人iPS細(xì)胞檢驗EV-Save™ 的細(xì)胞毒性。將添加了1/100 EV-Save™ 的達(dá)到1/5培養(yǎng)基量的TBS溶液加入培養(yǎng)基。人iPS細(xì)胞在配制好的培養(yǎng)基中培養(yǎng)3日，然后測量活細(xì)細(xì)胞數(shù)。

EV-Save™ 幾乎不影響人iPS細(xì)胞的增殖。

 

◆使用方法

使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（產(chǎn)品編號299-77603，293-77601）提取細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞外囊泡

1.將EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡封閉試劑添加到細(xì)胞培養(yǎng)上清中，100倍稀釋于細(xì)胞培養(yǎng)上清，上下顛倒或輕敲使其混合。

※細(xì)胞培養(yǎng)上清需要超濾濃縮時，請在濃縮前添加本品。

2.按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS的說明書進(jìn)行實(shí)驗，直到"洗脫細(xì)胞外囊泡"這一步。

3.將EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡封閉試劑添加到MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附帶的"Exosome Elution Buffer"中，100倍稀釋于"Exosome Elution Buffer"，顛倒或輕敲使其混合。

4.按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS說明書洗脫細(xì)胞外囊泡。

5.保存洗脫后的細(xì)胞外囊泡，或者進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗。

 

使用其他方法從細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取細(xì)胞外囊泡

1. 將EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡封閉試劑添加到細(xì)胞培養(yǎng)上清中，100倍稀釋于細(xì)胞培養(yǎng)上清，顛倒或輕敲使其混合。

2. 將EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡封閉試劑添加到所提取的細(xì)胞外囊泡中，100倍稀釋于細(xì)胞外囊泡儲存液，顛倒或輕敲使其混合。

3. 保存洗脫后的細(xì)胞外囊泡，或者進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗。

 

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝
058-09261	EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡吸附抑制劑	1 mL

◆相關(guān)產(chǎn)品

■試劑盒產(chǎn)品

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝
299-77603	MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS	2次
293-77601		10次
290-35591	Magnet Stand MagCapture™ 系列磁珠捕獲用磁力架	1個
297-79201	PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）	96次
297-79701	PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit PS Capture™外泌體流式試劑盒	300次
290-80301	PS Capture™ Exosome Isolation Resin Kit	1試劑盒：0.5mL Slurry

■抗體

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	交叉性	包裝
016-27061	Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) 抗CD63單抗（3-13）	人	20 μL
012-27063			100 μL
018-27641	Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated 抗CD63，單克隆抗體（3-13），熒光素結(jié)合	人	25次
014-27643			100次

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MagCapture™ 外泌體提取試劑盒

抑制對細(xì)胞外囊泡的實(shí)驗儀器的吸附