| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 產(chǎn)品價格 |
重組賴氨酰內(nèi)肽酶RLys-C
◆概述
賴氨酰內(nèi)肽酶最早從土壤細(xì)菌無色桿菌Achromobacter lyticus中分離得到，能夠特異性識別與切割肽鏈中Lys羧基端肽鍵，常被用于蛋白測序及Lys-X化合物的酶催化合成。
艾美迪選用Achromobacter lyticus來源的，克服大腸桿菌重組表達(dá)技術(shù)難題進行制備。本品最適pH 9.0~9.5,等電點為pH 6.9~7.0；最適反應(yīng)溫度30~37℃，50℃以上穩(wěn)定性下降。在適宜溫度下，該酶穩(wěn)定性良好，在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后，生物活性未發(fā)生降低?？蓮V泛用于蛋白組學(xué)分析，蛋白、抗體類藥物質(zhì)量檢測，多肽、蛋白類產(chǎn)品制備工藝中。
◆特性
● 高比活性，高特異性，可消化難以酶切的位點，空間構(gòu)象復(fù)雜或疏水性較強的蛋白（如膜蛋白）同樣適用
● 活性穩(wěn)定，對尿素、乙腈等變性劑耐受能力強
● 批量化生產(chǎn)，連續(xù)批次質(zhì)量穩(wěn)定，批間差小
● 高純度，重組表達(dá)避免了可能存在的雜酶殘留（e.g. Arg-C，Lys-N等）
◆來源
重組 E. coli 菌株，其克隆有來自的無色桿菌（A. lyticus）的蛋白酶I基因。
◆酶活定義
在0.2 mol/L pH 9.0的Tris-HCl緩沖中，溫度為37±2℃的條件下， 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量為一個活性單位（AU）。
◆純度
將 rLys-C以DTT 還原處理后， 還原電泳顯示純度＞99%
◆使用方法
本品為凍干粉，使用前先使用超純水或25 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5溶解。
◆應(yīng)用實例
RLys-C酶切重組人門冬胰島素原（Pro-Insulin-Aspart）
底物Pro-Insulin-Aspart分子量約為7 kDa，含有3個賴氨酸（K），采用 Lys-C 酶切的理論肽段示意圖如下：
酶切條件：酶與底物的質(zhì)量比為 1:10000，在50 mM Tris-HCl，pH 8.5中37℃酶切16 小時。
峰 A：酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart
峰 B：酶切后 B鏈+C肽+A鏈（去引導(dǎo)肽）
峰 C：酶切后B鏈+A鏈（去引導(dǎo)肽和C肽）
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名稱 |
RT |
Area |
Area% |
質(zhì)譜量 |
酶切位點 |
對應(yīng)肽段 |
|
Pro-Insulin-Aspart |
10.45 |
155.045 |
100% |
7096.94 |
/ |
酶切前 |
|
以IMD-RLys-C-酶切產(chǎn)物 |
11.57 |
201.6 |
100% |
5724.54 |
① ② ③ |
B鏈+A鏈 |
|
以其他公司重組Lys-C酶產(chǎn)物 |
10.49 |
146.9 |
61.78% |
7096.94 |
/ |
酶切前 |
|
10.62 |
81.5 |
34.29% |
6006.84 |
① |
B鏈+C肽+A鏈 |
艾美迪 的 RLys-C 酶切產(chǎn)物為切除引導(dǎo)肽和 C 肽的門冬胰島素前體，酶切位點①②③均酶切完全。
而其他公司產(chǎn)品僅部分切開酶切位點①，切除效率僅為34.29%，酶切位點②③均未被酶切，未能得到序列正確的門冬胰島素前體。
◆與其他公司產(chǎn)品對比
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底物 |
酶切位點對比 |
艾美迪 |
其他公司重組Lys-C |
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重組人門冬胰島素原 （Pro-Insulin Aspart） 分子量約為7 kDa，含有3個K |
①PK↓ |
++ |
+ |
|
②DK↓ |
++ |
– |
|
|
③GK↓ |
++ |
– |
|
|
重組人普通胰島素原 （Pro-Insulin） 分子量約為7 kDa，含有3個K |
①PK↓ |
++ |
+ |
|
②PK↓ |
++ |
+ |
|
|
②AK↓ |
++ |
+ |
|
|
PJ-10S小肽 |
①DK↓ |
++ |
+ |
相同底物濃度的酶切條件下艾美迪的 RLys-C 的酶切效率顯著高于其他品牌同類產(chǎn)品。以生成的肽段 YDDDDK 計算，艾美迪的RLys-C 的酶切率比其他品牌同類產(chǎn)品高約9倍；以生成的肽段 RGWK 計算，艾美迪的RLys-C的酶切效率比其他品牌同類產(chǎn)品高約8.6倍。
◆產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
活性單位 |
規(guī)格 |
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RLYS-C0401 |
重組賴氨酰內(nèi)肽酶 RLys-C |
3.0 AU/mg |
20 μg |
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RLYS-C0403 |
重組賴氨酰內(nèi)肽酶 RLys-C |
3.0 AU/mg |
1 mg |
◆相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
活性單位 |
規(guī)格 |
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RME0101 |
重組賴氨酰內(nèi)肽酶/重組胰蛋白酶混合裝 |
3.0 AU/mg |
20 μg |
|
RME0102 |
重組賴氨酰內(nèi)肽酶/重組胰蛋白酶混合裝 |
3.0 AU/mg |
20 μg x |
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