抗（6-4）光產(chǎn)物（6-4 PPs）單克隆抗體（克隆：64M-2）

用于研究DNA損傷和修復(fù)的DNA損傷抗體

 

◆背景

　　細胞暴露于紫外線（UV）輻射而產(chǎn)生的DNA損傷，在細胞周期停滯，在激活DNA修復(fù)，細胞殺傷，突變和腫瘤轉(zhuǎn)化中起著重要作用。由UVB（280-315nm，陽光的組分）和UVC（200-280nm）誘導(dǎo)的DNA損傷的主要類型是cyclobutane pyrimidine dimers環(huán)丁烷嘧啶二聚體（CPD）和（6-4）photoproducts光產(chǎn)物（6-4PP），兩者是由同一條DNA鏈上相鄰嘧啶核苷酸之間形成的。大約70-80%的UV誘導(dǎo)的DNA損傷是CPDs，剩余的是6-4PPs和6-4PPs的杜瓦異構(gòu)體引起的。這些類螺旋扭曲的DNA損傷在正常人細胞中通過核苷酸切除修復(fù)（NER）系統(tǒng)修復(fù)。 Mori等人制備了針對CPD或6-4PPs的特異性單克隆抗體。

　　這些抗體的研制，使我們能夠運用ELISA法定量檢測從培養(yǎng)細胞或皮膚表皮中純化的DNA中的光產(chǎn)物，并使用間接免疫熒光（IIF）顯示和測量培養(yǎng)的細胞或皮膚中的DNA所包含的光產(chǎn)物。這項技術(shù)將有助于在許多研究領(lǐng)域中了解對UV和DNA損傷的細胞應(yīng)答的分子機制，包括癌癥研究，光生物學(xué)，皮膚病學(xué)，眼科，免疫學(xué)和美容學(xué)。

 

◆來源

　　雜交瘤是由小鼠骨髓瘤細胞與經(jīng)過UVC照射小牛胸腺DNA綴合甲基化BSA免疫的Balb / c小鼠脾細胞融合而成。 收集該雜交瘤（克隆TDM-2）培養(yǎng)物上清液，并用冰冷的硫酸銨進行沉淀。 離心后，將溶解在少量雙蒸水中的沉淀用PBS透析。 然后將透析液凍干。

 

◆反應(yīng)性

　　1）抗體結(jié)合單鏈DNA中的6-4PPs。
　　2）抗體結(jié)合在每個雙嘧啶序列（TT，TC，CT和CC）中形成的6-4PPs。
　　3）抗體穩(wěn)定地結(jié)合在由超過8個堿基組成的寡核苷酸中形成的6-4PPs。

 

◆交叉反應(yīng)性

　　抗體可以與細菌、人等所有生物的變性DNA中的6-4PPs結(jié)合。

 

◆特征

●　與受損DNA特異性反應(yīng)

●　研究應(yīng)用，包括ELISA和IC

●　用于研究DNA損傷修復(fù)機制

●　顯示DNA損傷修復(fù)過程

●　適用于廣泛的研究領(lǐng)域：光生物學(xué)，光學(xué)醫(yī)學(xué)，癌癥等

 

◆應(yīng)用

●　免疫細胞化學(xué)；1：300
●　ELISA；1：1500
●　免疫印跡； 未測試
●　免疫沉淀；未測試
●　免疫組化；未測試
●　流式細胞術(shù)；未測試

 

通過ELISA測量正常人細胞中UV誘導(dǎo)的DNA損傷的誘導(dǎo)和修復(fù)

 

免疫熒光顯示UV誘導(dǎo)的DNA損傷

 

UV誘導(dǎo)6-4PP及其修復(fù)的可視化

以0.2μm比例間隔拍攝25個連續(xù)圖像重建核的三維圖像

◆相關(guān)產(chǎn)品

　　Cosmo Bio新的6-4PP（6-4）光產(chǎn)物ELISA試劑盒使用高靈敏度和特異性的單克隆抗6-4PPs抗體克隆64M-2 ，該試劑盒由Mori等人建立。 64M-2在文獻中被廣泛引用，并且被認為是用于6-4PPs檢測和定量的金標準抗體。Cosmo Bio的6-4PPs ELISA試劑盒是使用64M-2的第一個也是唯一的可商購的ELISA試劑盒。所有試劑盒組件均經(jīng)過優(yōu)化，可用于在培養(yǎng)細胞或皮膚表皮中高靈敏度CPD檢測。