ISOPLANT II

DNA快速提取試劑(植物/酵母/細(xì)菌)

　　ISOPLANT II是可以迅速地從植物?酵母?細(xì)菌提取DNA的試劑盒。與舊產(chǎn)品ISOPLANT一樣，利用Solution II的主要成分氯化芐，對(duì)細(xì)胞壁進(jìn)行破壞，在表面活性劑的作用下，使其溶解。植物組織的多糖及多酚比植物組織多，提取時(shí)?；烊隓NA中。這些物質(zhì)抑制限制性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)及PCR，難以對(duì)DNA進(jìn)行定量測(cè)定。改良后的新產(chǎn)品ISOPLANT II，可有效去除多糖及多酚等抑制物質(zhì)。不僅可以從草本植物提取，還可以從難度較大的木本植物提取，提取到的DNA可用于PCR及限制性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)。

◆特點(diǎn)

　　?　迅速地從植物?酵母?細(xì)菌提取基因組DNA

　　?　無(wú)需使用臼等工具搗碎材料，便于處理多個(gè)樣品

　　?　經(jīng)改良，可有效去除抑制物質(zhì)（多糖及多酚）

◆產(chǎn)品列表

保存方法

　　冷蔵保存（2～10°C）

　　若長(zhǎng)時(shí)間不使用RNase A ，請(qǐng)冷凍保存（-20°C）。除了RNase A ，其他產(chǎn)品可以室溫保存。

ISOPLANT II （20回分、100回分）
產(chǎn)品	容量（20次）	容量（100次）	備注
Wash Buffer	20 mL × 1	100 mL × 1
Solution I	6 mL × 1	30 mL × 1	可能析出白色沉淀，但不影響品質(zhì)。請(qǐng)進(jìn)行37°C左右的水浴，待結(jié)晶完全溶解后即可放心使用。
Solution II	3 mL × 1	15 mL × 1	主要成分是氯化芐。氯化芐為危險(xiǎn)品，請(qǐng)小心使用。
Solution III-A	2 mL × 1	10 mL × 1	Solution III-A為白色懸濁液，蒸發(fā)后只剩下白色固相，請(qǐng)使用滅菌蒸餾水溶解。
Solution III-B	2.5 mL × 1	12 mL × 1
TE（pH8.0）	2 mL × 1	10 mL × 1	10 mM Tris-HCl（pH8.0）, 1 mM   EDTA
RNase A        （1 mg/mL）	20 μL × 1	100 μL × 1	若長(zhǎng)時(shí)間不使用RNase A ，請(qǐng)冷凍保存（-20°C）。

◆使用實(shí)例

操作流程

植物	酵母、細(xì)菌

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

1. 使用從植物葉子提取的DNA進(jìn)行RAPD分析

2. 使用從植物葉子提取的DNA進(jìn)行制限性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)

3. 從細(xì)菌、酶提取得DNA進(jìn)行制限性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)

4. ISOPLANT II與舊產(chǎn)品（ISOPLANT）的純度比較

Data 1: 使用從植物葉子提取的DNA進(jìn)行RAPD分析

　　分別使用各樣品0.1g凍結(jié)粉碎的葉子的1/100提取到的DNA，進(jìn)行RAPD分析。

RAPD-PC
PCR Mixture			PCR條件
Template DNA	1 μL		95°C	3 min.	1 cycle
10×Gene Taq Universal Buffer	5 μL		40°C	5 min.
dNTP Mixture (2.5 mM each)	4 μL		72°C	1 min.
Arbitrary Primer(AP-A-2 primer) (10 μM)	1 μL
Gene Taq (5   units/μl)	0.25 μL		95°C	15 sec.	25 cycles
H2O	38.75 μL		40°C	2 min.
Total Volume	50 μL		72°C	1 min.
			72°C	5 min.

結(jié)果

	lane 1. 西瓜 lane 2. 黃瓜 lane 3. 南瓜 lane 4. 玉米 lane 5. 水稻 lane 6. 蔥 lane 7. 豆子 lane 8. 煙草	lane 9. 菠菜 lane 10. 銀杏 lane 11. 蘋(píng)果 lane 12. 牡蠣 lane 13. 桃 lane 14. 柚子 lane 15. 梅干 lane 16. 梨
	M : Marker 4 (φX174/Hae III)

　Arbitrary Primer: AP-A-2(TGGATTGGTC)

　Taq DNA polymerase: Gene Taq

　3% Agarose 21

Data 2: 使用從植物葉子提取的DNA進(jìn)行制限性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)

　　分別使用各樣品0.1g凍結(jié)粉碎的葉子的1/20提取到的DNA，進(jìn)行制限性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)(5～20 units)。

	lane 1. 煙草 lane 2. 菠菜 lane 3. 胡蘿卜 lane 4. 梨 lane 5. 水稻 lane 6. 茶 lane 7. 柚子 lane 8. 蘋(píng)果
	M : Marker 2 (λ/Hind III?EcoR I) a : intact DNA b : Hind III digest + RNase A

　　　　　　　0.8% Agarose S 

　　?注意事項(xiàng)　提取DNA時(shí)進(jìn)行NaBH4處理，獲得上述數(shù)據(jù)。

Data 3: 從細(xì)菌、酵母提取的DNA進(jìn)行制限性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)

　　分別取1/20從1.5ml培養(yǎng)液體提取到的DNA，進(jìn)行制限性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)(5～20 units)。

	lane 1. 粘質(zhì)沙雷氏菌　Serratia marcescens lane 2. 牛莫拉氏桿菌　Moraxella bovis lane 3. 流感嗜血桿菌C 　Haemophilus influenzae c lane 4. 普通變形桿菌　Proteus vulgaris lane 5. 裂殖酵母　Shizosaccharomyces pombe lane 6. 畢赤酵母　Pichia pastoris lane 7. 釀酒酵母　Sacaomyces cerevisiae
	M : Marker 2 (λ/Hind III?EcoR I) a : intact DNA b : Hind III digest + RNase A

　　　　　　　0.8% Agarose S 

Data 4: ISOPLANT II與舊產(chǎn)品（ISOPLANT）的純度比較

　　使用相同的樣本量，分別用ISOPLANT II及舊產(chǎn)品（ISOPLANT）從菠菜及蘋(píng)果葉子提取DNA，檢測(cè)吸光度（200～300 nm）

菠菜	蘋(píng)果

　　

　　使用ISOPLANT II提取DNA，在260nm有峰值。表明DNA不含多糖及多酚等夾雜物，純度較高。

◆備注

　　本產(chǎn)品為實(shí)驗(yàn)研究用試劑，不可用于醫(yī)療或其他用途。

　　不了解試劑基本知識(shí)的人士請(qǐng)不要使用。

◆相關(guān)產(chǎn)品

　

　　?　 從植物?酵母?細(xì)菌提取DNA試劑盒　ISOPLANT

[ 1 ]　Xing S. and Aharon G.: Analytical Biochemistry, 174, 650-657 (1988)

[ 2 ]　C. S. Kim, C. H. Lee, J. S. Shin, Y. S. Chung and N. I. Hyung: Nucleic Acids Res., 25 (5) 1085-1086 (1997)