從石蠟包埋組織切片提取RNA試劑盒

ISOGEN PB Kit

　　本產(chǎn)品是石蠟包埋組織切片RNA提取試劑盒。包含從脫石蠟，Proteinase K處理組織到利用ISOGEN-LS提取RNA，非常簡便、短時間（約2小時）即可完成。提取的RNA可用于RT-PCR檢測。

◆特點

●　從石蠟包埋組織切片提取RNA

●　操作簡便，且用時少（2小時）

●　提取的RNA可用于RT-PCR

◆用途

●　RT-PCR 檢測RNA 病毒

●　RT-PCR 檢測mRNA

●　檢測石蠟包埋組織切片的RNA 保存度等

◆產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品	包裝	備注
Proteinase K（20 mg/mL）	100 μL×1
Extraction Buffer	3 mL×1	可室溫保存 Extraction Buffer 可能出現(xiàn)白色結(jié)晶，非質(zhì)量問題。在37～50°C條件下，孵化后，結(jié)晶完全溶解后使用。
ISOGEN-LS	10 mL×1	非醫(yī)療用劇毒物 可冷藏保存（2～10°C）
Ethachinmate	60 μL×1	可冷藏保存（2～10°C）
Deoxyribonuclease（RT Grade）	20 μL×1
10X DNase（RT Grade）Buffer II	100 μL×1
Stop Solution（RT Grade）	100 μL×1
DEPC treated Water	500 μL×2	可室溫保存

保存方法

　　冷凍保存（-20°C）

試劑盒以外必需的試劑

●　Lemosol^? 或Lemosol^? A

●　乙醇

●　氯仿

●　異丙醇

◆使用實例

操作前需知

　　從石蠟包埋組織提取RNA時， RNA的分解持續(xù)到包埋過程，其RNA的完整性比從新鮮組織提取的RNA低。

　　從哺乳動物的新鮮組織提取的total RNA經(jīng)過電泳后，檢測出明亮的28S rRNA和18S rRNA條帶，其比例約為2 : 1。使用石蠟包埋組織進行提取時，無法得出這個結(jié)果。實際上，使用小鼠的石蠟包埋組織進行提取實驗，幾乎無法檢測28S rRNA。因此，在包埋過程中引導(dǎo)RNA分解。石蠟包埋狀態(tài)關(guān)系到RNA的分解程度。有可檢測出18S rRNA的石蠟塊，也有18S rRNA降解太多而無法檢測出來。Nippon Gene將判斷基準(zhǔn)設(shè)定為剩余一個18S rRNA，in situ hybridization等、需要高保存度RNA時，建議設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。

　　即使RNA已分解（包括無法確認(rèn)18S rRNA的情況），可使用RT-PCR檢測出基因，使用RT-PCR時，RNA的完整性較好。但是使用石蠟包埋組織切片進行PCR時，擴增效率比一般情況的低，請注意避免引物長度設(shè)置過大（400 bp以下，盡量設(shè)置為200 bp以下）。

操作流程

　　　　　

操作實例1　從小鼠頜下腺石蠟包埋組織切片提取RNA

　　按照操作流程，從4片10 μm小鼠頜下腺石蠟包埋組織切片，提取RNA ，取1/4的 量（5 μL），使用1% 福爾馬林変性Agarose S 進行電泳。

　　

操作實例2　RT-PCR檢測小鼠Gapd基因

從小鼠頜下腺石蠟包埋組織切片提取500 ng RNA， DNase 處理后，進行RT-PCR，檢測出小鼠glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（Gapd）基因外顯子5（258 bp）。

　　　

　　　

關(guān)于微量樣本RT-PCR

　　對于無法得到提取RNA的電泳結(jié)果或10 ng 以下的情況，建議添加RT反應(yīng)補助試劑RTmate，進行逆轉(zhuǎn)錄。

◆備注

●　本產(chǎn)品為實驗研究用試劑。請勿用于醫(yī)療用途。

◆資料 Data Sheet

產(chǎn)品手冊

ISOGEN PB Kit 第二版 （PDF 261 KB）

SDS（Safety Data Sheet）

ISOGEN PB Kit （PDF）

◆相關(guān)產(chǎn)品

液體樣本提取RNA用試劑　ISOGEN-LS

RT反應(yīng)補助試劑　RTmate