ISOGEN II

總RNA及小RNA提取試劑

    離心后的沉淀              ISOGEN II 100 mL

　　ISOGEN II是從動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取總RNA和小RNA的試劑。本品是含有苯酚和胍的均勻液體，根據(jù)與細(xì)胞成分的相互作用，能一步分離RNA。

　　使用舊產(chǎn)品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要進(jìn)行液相分離，而本產(chǎn)品則無(wú)需此步驟。在樣品中加入ISOGEN II溶解或是均質(zhì)之后，添加水， DNA、蛋白質(zhì)、多糖類(lèi)等沉淀（不溶化），進(jìn)行離心分離后可以去除（右圖）。用酒精沉淀、洗凈、溶解上清液之后，能分離出高純度的RNA。若配合ISOGENOME 使用，也能夠跟ISOGEN一樣從同一樣本中提取DNA。

◆特點(diǎn)

　　?　無(wú)需使用氯仿分離RNA

　　?　相比舊產(chǎn)品（ISOGEN等），小RNA的提取率更高

　　?　可以把高分子RNA（＞200bases）和小RNA（＜200bases〉分離（也有不分離的方案）

　　?　混入的DNA較少，提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR

　　?　約一小時(shí)內(nèi)可提取出RNA

◆用途

　　從活體組織提取RNA等等

◆產(chǎn)品列表

ISOGEN   II （10 ml、100 ml）
產(chǎn)品	包裝	保存條件	備注
ISOGEN II	1瓶	2～10°C (陰暗處)	非醫(yī)療用劇毒物 外觀：青色溶液 容器（塑料瓶）外配有袋子。

運(yùn)輸方法

　　本品在室溫下運(yùn)輸。產(chǎn)品到達(dá)后，在2~10℃條件下保存即可正常使用。

◆使用案例

操作流程

?除了本產(chǎn)品，根據(jù)需準(zhǔn)備RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯異丙醇。
?可使用聚丙烯管，使用前確認(rèn)是否能夠承受離心強(qiáng)度（12K x g）及ISOGEN II（苯酚）。
?離心操作建議在4-28℃進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

1.提取的RNA的電泳

2.檢驗(yàn)出miRNA
3.RT-PCR
4.RNA提取共沉淀劑效果（測(cè)定吸光度）
5.RNA取量的基準(zhǔn)
6.使用ISOGEN II從植物提取總RNA
7.使用ISOGEN II從植物提取高分子RNA及小RNA分離＜改變流程＞

Data 1：提取的RNA的電泳

　　

　　按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作順序，提取RNA，進(jìn)行電泳。

瓊脂糖凝膠電泳
	M: RNA Ladder (編號(hào):311-06261)   道1：ISOGEN    提取 總RNA (2μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 總RNA (2μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2μg)   1.2% Agarose S （甲醛變性） EtBr 染色

聚丙烯酰胺凝膠電泳
	道1：ISOGEN     提取 總RNA (5μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 總RNA (5μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5μg)   12% 聚丙烯酰胺凝膠 （Urea 變性） EtBr 染色

　　

　　▶　道1、2中，ISOGENⅡ與ISOGEN一樣，可提取全DNA。

　　▶　道3、4中，ISOGENⅡ可區(qū)分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。

Data 2：檢驗(yàn)miRNA

對(duì)使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ提取的總RNA進(jìn)行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析 　▶　ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能顯示miRNA。

Data 3：RT-PCR

　　使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ從Hela細(xì)胞提RNA作為模板。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)出β-actin基因。同時(shí)，進(jìn)行不產(chǎn)生RT反應(yīng)的控制組實(shí)驗(yàn)。

PCR條件

1：模板RNA量 500ng 2：模板RNA量 100ng 3：模板RNA量 20ng M：Gene Ladder  （編號(hào)：316-06951）

　　▶　使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA較少。

Data 4：RNA提取共沉淀劑效果（測(cè)定吸光度）

　　ISOGEN Ⅱ的使用指南中分離小RNA時(shí)，對(duì)使用共沉淀劑Ethachinmate（Nippon Gene 產(chǎn)品編號(hào)：312-01791）或者Glycogen（和光純藥工業(yè) 產(chǎn)品編號(hào)：077-05311）時(shí)提取到小RNA情況進(jìn)行了比較。

方法   按照使用指南，從Hela細(xì)胞及小鼠肝臟回收小RNA，檢測(cè)吸光度，計(jì)算小RNA的含量。將使用Ethachinmate提取到的數(shù)量看作1，在圖表中列出了含量的相對(duì)值。

　　▶　使用Glycogen作為共沉淀劑回收小RNA時(shí)的回收量較多，變異較少。

Data 5：RNA取量的基準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)材料		高分子 RNA 的離析	總 RNA的離析
組織	肝臟	5～7 μg RNA/mg tissue	6～8 μg RNA/mg tissue
	腎臟、脾臟	3～4 μg RNA/mg tissue	3～4 μg RNA/mg tissue
	骨骼肌腦、肺	0.5～1.5 μg RNA/mg tissue	0.5～1.5 μg RNA/mg tissue
	胎盤(pán)	1～3 μg RNA/mg tissue	1～3 μg RNA/mg tissue
培養(yǎng)細(xì)胞	上皮細(xì)胞	5～8 μg RNA/106 cells	5～10 μg RNA/106 cells
	成纖維細(xì)胞	3～5 μg RNA/106 cells	4～6 μg RNA/106 cells

Data 6：使用ISOGEN II從植物提取總RNA

從植物抽提全RNA例子 (PDF 222KB)

Data 7：使用ISOGEN II從植物抽提高分子RNA及小RNA分離＜變化流程＞

從植物抽提高分子RNA及小RNA離析例子 (PDF 218KB)

◆注意事項(xiàng)

　　?　本品是實(shí)驗(yàn)研究用的試劑，不能作為醫(yī)藥品或其他目的使用。另外，如果您對(duì)試劑的基本的知識(shí)不了解，請(qǐng)不要使用。

　　?　ISOGEN II是非醫(yī)療用劇毒物（苯酚制劑），請(qǐng)小心操作。

　　?　使用時(shí)請(qǐng)穿著適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)設(shè)備（手套、眼鏡等）。

　　?　操作場(chǎng)所保持通風(fēng)，以免吸入蒸汽。

　　?　如果接觸皮膚或眼睛，請(qǐng)用大量的水沖洗15分鐘或以上，并及時(shí)就診。

　　?　請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

　　?　對(duì)于因不按照說(shuō)明書(shū)操作而導(dǎo)致的事故，Nippon Gene不負(fù)任何責(zé)任。

◆備注

　　本產(chǎn)品是實(shí)驗(yàn)研究用試劑，請(qǐng)勿用作醫(yī)療用途。

◆資料 Data Sheet

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

　　?　ISOGEN II　產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)第三版（100 ml產(chǎn)品小冊(cè)子） (PDF 195KB)

　　?　(內(nèi)容與冊(cè)子相同） (PDF 168KB)

SDS(Safety Data Sheet)

　　?　ISOGEN II 　安全數(shù)據(jù)圖表(PDF)

宣傳單

　　?　冊(cè)子（PDF 2MB）

◆相關(guān)產(chǎn)品

　　 ?　RNA抽提用試劑　ISOGEN、ISOGEN-LS

　　 ?　RNA抽提用試劑　ISOGEN with Spin Column

　　 ?　酒精沉淀用共沉淀劑　Ethachinmate

　　 ?　緩沖器　ddWater, TE（pH 8.0）

Q:　　可以從全血等血液樣本中抽提RNA嗎？

A:　　ISOGEN II難以提取出高純度的RNA，建議使用ISOGEN-LS。

Q:　　可以提取DNA或蛋白質(zhì)嗎？

A:　　舊法使用ISOGEN，可以從同一樣本回收DNA及蛋白質(zhì)，但由于此次研發(fā)的是提取RNA的方法，ISOGEN II中混入的DNA較少，無(wú)法提取DNA及蛋白質(zhì)。不過(guò)，配合使用DNA提取試劑ISOGENOME，可回收DNA樣本。

　　[ 1 ]　Chomczynski, P. ： Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.

　　[ 2 ]　Chomczynski, P. and Sacchi, N.：”Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroform extraction”, Anal. Biochem，162, 156-159（1987）

　　[ 3 ]　Chomczynski, P.：”A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques,15, 532-537（1993）

　　[ 4 ]　Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.：”Effect of pH and ionic strength on the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity”,Biotechniques, 22, 474-481（1997）