miRNA研究專(zhuān)題

　　Wako提供miRNA從分離、克隆到靶基因功能研究的一系列試劑盒。

　　列表中的產(chǎn)品僅僅用于實(shí)驗(yàn)室研究，不能作為藥物、食物或人的使用。

◆簡(jiǎn)便高效的microRNA分離試劑盒——microRNA Isolation Kit

  產(chǎn)品編號(hào)：291-70201

　　microRNA Isolation Kit可同時(shí)分離出miRNA和及其靶基因mRNA，操作簡(jiǎn)單。分離得到的Ago IP RNA fraction，可用于miRNA和靶基因mRNA的克隆、定量和表達(dá)譜分析。

◆高效的miRNA克隆——microRNA Cloning Kit Wako

   產(chǎn)品編號(hào)：290-66501

●　高效率克隆microRNA

●　可克隆具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的microRNA

●　重復(fù)性好。

◆miRNA靶基因mRNA的克隆—— Target mRNA Cloning Kit Wako

  產(chǎn)品編號(hào)：298-68001

　　miRbase中miRNA的數(shù)目已經(jīng)達(dá)到10883，但是miRNA已知的靶序列mRNA卻很少， 而miRNA的靶序列研究也是其功能研究一個(gè)重要部分，由于miRNA與其靶mRNA存在不完全配對(duì)，對(duì)計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)造成困難。

　　miRNA、靶mRNA和Ago蛋白會(huì)以復(fù)合物RISC形式存在，本試劑盒通過(guò)從細(xì)胞中分離得到的RISC復(fù)合物中，直接有效的克隆特定miRNA的靶序列mRNA，可作為miRNA靶序列的新發(fā)現(xiàn)與篩選的有力工具。

特點(diǎn)

●　用于擴(kuò)增微量 mRNA

●　可直接從Ago IP RNA片段中克隆mRNA，用于microRNA 靶基因的研究

靶序列mRNA的cDNA克隆實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)圖：

               

◆PCR反應(yīng)的純化試劑盒——PCR  Purification Kit Wako

  產(chǎn)品編號(hào)：298-67901

　　不需要使用凝膠試劑盒回收純化，可通過(guò)PCR  Purification Kit Wako直接去除PCR擴(kuò)增后DNA反應(yīng)液中含有的引物、引物二聚體、dNTP、酶類(lèi)如DNA聚合酶和限制內(nèi)切酶等物質(zhì)，操作簡(jiǎn)單，純化后DNA溶液可用于限制酶處理、Southern雜交、標(biāo)記，克隆，測(cè)序，體外轉(zhuǎn)錄等實(shí)驗(yàn)。

miRNA試劑盒（Wako）的應(yīng)用：（miR-122 targeted mRNA的研究）

實(shí)驗(yàn)總路線(xiàn)圖：

①　擴(kuò)增到cDNA電泳檢測(cè)

　　結(jié)果顯示：可以從Ago IP RNA片段中成功的擴(kuò)增到cDNA.

②　擴(kuò)增后的cDNA的克隆

　　miR-122的潛在靶序列的cDNA克隆 ，然后通過(guò)在線(xiàn)軟件如TargetScan 4.2對(duì)獲得序列是否是靶序列進(jìn)行評(píng)分。

　　※ 1. CSP：Context Score Percentile

　　靶序列mRNA的合理參數(shù)值

　　※ 2.對(duì)照細(xì)胞

　　轉(zhuǎn)染了GL3（熒光素酶）siRNA的HepG2細(xì)胞

③　靶序列 mRNA 的鑒定（ qRT-PCR）

　　mRNA的定量（CSP※1 of Clone ≧ 80）

　　其中ALDOA mRNA已經(jīng)證實(shí)是miR-122的靶基因，此外，通過(guò)此方法發(fā)現(xiàn)了很多新的miR-122潛在的靶序列。

Target mRNA Cloning Kit	A useful approach to total analysis of RISC-associated RNA
298-67901	298-68001

參考文獻(xiàn)：

Hayashida, Y., et al . A useful approach to total analysis of RISC-associated RNA., BMC Research Notes , 2, 169（2009）