Ethachinmate共沉淀劑

Ethachinmate

◆原理

       共沉淀劑Ethachinmate是基因工程學的標準時機。作為暢銷產(chǎn)品，效果顯著。
       Ethachinmate適用于核酸（DNA與RNA）乙醇或isopropanol沉淀時的丙烯酰胺系高分子載體溶液，在鹽類存在的情況下（例如 ＞0.1mol/L Sodium Acetate）加上Ethachinmate進行酒精沉淀，能得到如下優(yōu)點。

◆優(yōu)點?特色

● 可回收微量核酸
   可定量性回收20ng/mL以上的DNA（＞100個堿基對）及（＞120個堿基）。
● 乙醇沉淀迅速
   無需-20℃或-80℃孵化，添加乙醇后可直接離心。
● 酶反應無障礙
   回收的核酸，在水及緩沖液中容易溶解?；煸谝黄鸬腅thachinmate完全不阻礙酶反應。
● 沉淀可觀察到
   因為Ethachinmate自己根據(jù)究竟沉淀形成沉淀，無需擔心微量核酸沖洗了重要樣品。

無DNase，RNase活性測試劑

用一下DNase及RNase free方法可確認是否含有Ethachinmate

DNase實驗：向1μgλ/Hin d III 中加入3μLEthachinmate，在37℃的恒溫箱中放置16小時候，進行瓊脂糖凝膠電泳，圖像確認無變化。

RNase實驗：向2μg 16S及23S的rRNA中加入3μL Ethachinmate，在37℃的恒溫箱中放置16小時后，進行瓊脂糖凝膠電泳，圖像確認無變化。

◆使用方法

DNA或者RNA溶液（100μL）

↓←3 mol/L Sodium Acetate（添加），3,3μL*1）

↓←Ethachinmate 1μL*2）

↓←渦流

↓←2~2.5倍量的乙醇

↓渦流*3）

↓10kgxg室溫下反應5分鐘*4）

沉淀*5）

*1）（氯）鹽的最終濃度必須在0.1mol/L以上

*2）每100μL DNA或RNA溶液中加入1μL  Ethachinmate。但溶液量為300μL以上時，加入3μL可達到飽和。

*2）而且再次進行上述操作時，無需添加Ethachinamte?！。ㄈ舴磸吞砑覧thachinmate會導致DNA溶液變

*2）得黏稠，影響到后面的操作。）

*3）進行充分混勻，可實現(xiàn)微量DNA的定量回收。

*4）不必進行冷卻

*5）沉淀可目測。溶解于其他緩沖液等中，可直接作為各種酶底物使用。而且，必須用70%的乙醇進行洗滌。

Q：    有沒有DNase，Rnase雜質(zhì)？
A：    沒有。Ethachinmate用以下的方法可以確認無DNae、RNase活性。
          Dnase 實驗：向1μg的/Hin d III中加入3μL Ethachinmate，在37℃的恒溫箱中放置16小時候，進行瓊脂

          糖凝膠電泳，圖像確認無變化。
          RNase實驗：向2μg 16S及23S的rRNA中加入3μL Ethachinmate，在37℃的恒溫箱中放置16小時后，進

          行瓊脂糖凝膠電泳，圖像確認無變化。

Q：    可以使用RNA回收嗎？
A：    沒有問題。

Q：    高效回收的核酸濃度和核酸鏈長度是多少？
A：    可回收幾乎所有的20ng/ml 以上的DNA（100bp以上）及RNA（120 base以上）。

Q：    260nm的吸光度會影響定量嗎？
A：    無影響。

Q：    100μL DNA溶液對應加入1μL Ethachinmate。若DNA溶液少于100μL，應該怎樣做才好？
A：    請加入1μL Ethachinmate。為了DNA沉淀可目測，需要1μL以上的Ethachinmate。另外，3M Sodium

          Acetate及1μL的Ethachinmate。

Q：    300μL以上的DNA溶液，Ethachinmate的添加量是多少？
A：    DNA溶液為300μL以上，無論DNA溶液的量是多少，都請加入3μL Ethachinmate。無需加入過量的Eth-

          achinmate。另外，3M Sodium Acetate請按此比例換算適量添加。
          例：DNA溶液為600μL，則加入19.8μL的3M Sodium Acetate及3μL的Ethachinmate

Q：    DNA溶液進行2次以上乙醇沉淀時，最好第二次以后也每次加上Ethachinmate嗎？
A：    Ethachinmate添加一次無需再添加，如果重復添加Ethachinmate，DNA溶液會變得黏稠，將阻礙以后的

          操作。

Q：    冷凍時，會不會影響Ethachinmate的效果？
A：    不會

Q：    高壓處理會不會影響Ethachinmate的效果？
A：    不會

Q：    如果用苯酚/氯仿處理含Ethachinmate的DNA溶液，會不會影響Ethachinmate的效果？
A：    不會

Q：    對電泳模型有沒有影響？
A：    沒有，但根據(jù)電泳條件的不同，數(shù)十kbp以上的DNA會產(chǎn)生寬頻帶條。

Q：    對限制性內(nèi)切酶反應有沒有影響？
A：    沒有。

Q：    對T4 DNA Ligase反應有沒有影響？
A：    沒有。

Q：    對AMV Reverse Transcroptase的cDNA合成反應有沒有影響？
A：    沒有。

Q：    對使用Taq DNA Polymerase的PCR反應有沒有影響？
A：    沒有。

Q：    對Klenow Flagment反應有沒有影響？
A：    沒有。

Q：    對大腸桿菌的轉化有沒有影響？
A：    沒有。

Q：    對in vitro組裝有沒有影響？
A：    λ 噬菌體的in vitro組裝效率稍微下降。

Q：    加入Ethachinmate，乙醇沉淀會形成核苷酸沉淀嗎？
A：    使用8mer及17mer的的低聚核苷酸進行實驗，與是否添加Ethachinmate無關，回收率沒有變化。

Q：    在含有甲酰胺的雜交溶液中有無變性嗎？
A：    無變性。

Q：    對blotting有沒有影響？
A：    沒有。

Q：    對序列反應有沒有影響？
A：    不影響使用ABI Prism 377的周序列反應。對脫氧發(fā)的序列反應也沒有影響。

Q：    添加Ethachinmate是否有助于從管中脫落沉淀？
A：    要看管的材質(zhì)。比如Eppendorf公司制的Safe-Lock管有容易脫落的傾向。