食品分析用

 α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒

　　淀粉分解產(chǎn)生二糖，α-葡萄糖苷酶能分解二糖產(chǎn)生葡萄糖，使血液中的血糖升高。因此，可通過(guò)抑制α-葡萄糖苷酶來(lái)抑制血糖升高。

　　近來(lái)有研究表明從不同的植物體中可以檢測(cè)到α-葡萄糖苷酶抑制物質(zhì)，研究人員致力于將其應(yīng)用到抑制血糖升高功能性食品的研究。

　　α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒能測(cè)定對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用。與LabAssay™ 葡萄糖（血糖）檢測(cè)試劑盒配套使用，可用于檢測(cè)食品等成分中對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。

◆試劑盒組成

試劑名稱	容量	數(shù)量	主要成分
酶試劑	1mL	2	α-葡萄糖苷酶
緩沖劑	50mL用	2	馬來(lái)酸/順丁烯二酸二鈉
基質(zhì)液1	20mL用	2	D-(+)-麥芽糖
基質(zhì)液2	20mL用	2	蔗糖
陽(yáng)性對(duì)照	100mg	1	阿卡波糖

*阿卡波糖是一種新型口服降糖藥。在腸道內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性抑制葡萄糖苷水解酶。降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相應(yīng)減緩，因此可具有使飯后血糖降低的作用。

◆除試劑盒外所需器具、器材

　　●　LabAssay™ 葡萄糖（血糖）檢測(cè)試劑盒

　　●　96孔透明微孔板

　　●　酶標(biāo)儀（505 nm吸光度）

　　●　微量移液管

　　●　恒溫槽（37℃）

◆實(shí)驗(yàn)操作流程

◆檢測(cè)步驟

Ⅰ．配制試劑

決定稀釋倍數(shù)的預(yù)實(shí)驗(yàn)

	麥芽糖	蔗糖
基質(zhì)溶液	麥芽糖溶液 50μL	蔗糖溶液 50μL
純凈水	25μL
37℃，3分鐘

（葡萄糖定量）

　?。保?孔微孔板中分別加入100μl的酶反應(yīng)液和稀釋的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（濃度：15,10,5,2.5mg/dl）添加150μLLabAssay™ Glucose顯色劑，充分混合。

　?。玻?7℃下進(jìn)行10分鐘溫育，測(cè)定505nm的吸光度。

　　３．麥芽糖的葡萄糖生成量為10mg/dL，蔗糖為5mg/dL，以此求稀釋倍率。

 

Ⅱ．正式試驗(yàn)（酶反應(yīng)）

＜樣品配制＞

	麥芽糖	蔗糖
基質(zhì)溶液	麥芽糖溶液 50μL	蔗糖溶液 50μL
樣品溶液或陽(yáng)性對(duì)照溶液   （對(duì)照組是純凈水）	25μL
37℃，3分鐘
酶稀釋液	酶稀釋液25μL（根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)決定稀釋倍數(shù)）	酶稀釋液25μL（根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)決定稀釋倍數(shù)）
攪拌后，37℃下，準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘
純凈水	400μL
立即在沸水中加熱3分鐘后，冷卻

 

＜空白對(duì)照配制＞

	麥芽糖	蔗糖
基質(zhì)溶液	麥芽糖溶液 50μL	蔗糖溶液 50μL
樣品溶液或純凈水	25μL
純凈水	400μL
酶稀釋液	酶稀釋液25μL（根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)決定稀釋倍數(shù)）	酶稀釋液25μL（根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)決定稀釋倍數(shù)）
立即在沸水中加熱3分鐘，冷卻

Ⅲ．葡萄糖定量

　　→同預(yù)試驗(yàn)，使用LabAssay™ 葡萄糖（血糖）檢測(cè)試劑盒測(cè)定。

Ⅳ．IC50計(jì)算

　?。保詫?duì)照溶液的葡萄糖生成量為α-葡萄糖苷酶的100%活性，通過(guò)各濃度樣品溶液的葡萄糖生成量，求α-葡萄糖苷酶比活性；

　　２．以樣品或陽(yáng)性對(duì)照溶液濃度（酶反應(yīng)液中的終濃度）為橫軸，以α-葡萄糖苷酶比活性為縱軸繪制半對(duì)數(shù)線圖，從得出的近似曲線算出比活性50%時(shí)樣品的濃度（IC50值）。

 

相關(guān)資料

α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒