SLP肽聚糖檢測試劑

SLP Reagent Set

 

◆原理

        蠶（Bombyx mori）的體液內(nèi)存在著被稱為酚氧化酶的生化前體酚氧化酶級(jí)聯(lián)的軀體防御機(jī)能，通過肽聚糖（PG）以及（1→3）-β-D-葡聚糖（β-葡聚糖）獲得反應(yīng)，最終使苯酚氧化酶（PO）活性化。經(jīng)推測PO活性化機(jī)制是包含復(fù)數(shù)絲氨酸蛋白酶活化性的級(jí)聯(lián)機(jī)制，但至今沒有獲得證實(shí)。目前認(rèn)為該級(jí)聯(lián)機(jī)制在異物侵入時(shí)于昆蟲體內(nèi)為識(shí)別黑色素形成擔(dān)當(dāng)著重要的角色。

       SLP試劑用蠶的體液無菌提取調(diào)制而成，是包含酚氧化酶級(jí)聯(lián)全部遺傳因子的凍干品。本試劑通過PG以及β-葡聚糖得到活性化，并氧化包含反應(yīng)底物的DOPA（L- 3,4-二羥基），從而生成黑色素。由于PG大部分是細(xì)菌細(xì)胞壁、β-葡聚糖也可被多種真菌細(xì)胞壁識(shí)別，以生成的黑色素作為指標(biāo)，可檢測出各種微生物。

       SLP試劑的活性化機(jī)制如圖1所示。換言之，通過PG或是β-葡聚糖與各種各樣的識(shí)別蛋白（PGRP與βGRP）結(jié)合，酚氧化酶級(jí)聯(lián)發(fā)生反應(yīng)，最終使得PO被活性化?；钚曰蟮腜O氧化底物中的DOPA最終生成黑色素。能被鱟血球提取物（鱟試劑）檢測出的內(nèi)毒素雖不能使SLP的級(jí)聯(lián)機(jī)制活性化，但無法被鱟試劑檢測出的PG卻能被SLP試劑檢測出來。

       SLP試劑雖然會(huì)對來源于各類細(xì)菌的PG和帶有β-1,3-糖苷鍵的β-葡聚糖產(chǎn)生強(qiáng)烈反應(yīng)，但對以革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁作為成分的脂多糖卻幾乎不反應(yīng)。

 

 

 

       不僅僅是革蘭氏陽性細(xì)菌，PG里也存在著革蘭氏陰性細(xì)菌。不管是陽性還是陰性的革蘭氏細(xì)菌，SLP試劑對廣泛的一般細(xì)菌均產(chǎn)生反應(yīng)。此外，也會(huì)對真菌來源的β-葡聚糖起反應(yīng)，因此認(rèn)為SLP試劑可作用于所有微生物。根據(jù)以上這些，我們認(rèn)為把能對內(nèi)毒素以及β-葡聚糖起反應(yīng)的鱟試劑與SLP試劑合并使用，可以對檢測材料中的微生物種類進(jìn)行預(yù)測。

 

◆優(yōu)點(diǎn)?特色

 

● 可高精度測量肽聚糖和β-葡聚糖。

● 無需特殊檢測裝置，僅用視覺判斷即可測量。

● 采用酶標(biāo)儀和并列的比濁時(shí)間分析裝置Toxinometer^?可更高精度和高感度肽聚糖和β-葡聚糖的定量數(shù)值。

● 本產(chǎn)品于2~10℃溫度下冷藏可保存18個(gè)月以上。

 

◆案例?應(yīng)用

● 研究闡明肽聚糖的組織活性相關(guān)、生物合成、代謝、病因生成等

● 作為水質(zhì)污染的指標(biāo)

● 人工透析液的微生物污染對策

● 醫(yī)藥制品、生物制劑、遺傳因子工學(xué)制成品等的菌體混入的測出。

● 昆蟲活體防御反應(yīng)結(jié)構(gòu)的研究

 

 

■測定方法

       在使用了SLP的前提下，PG以及β-葡聚糖均可被Toxinometer^? 法、酶標(biāo)儀法、視覺判斷法測出。

       在Toxinometer^?和酶標(biāo)儀中，隨著活性化生成的色素量掌握吸光度的變化、直到吸光度達(dá)到預(yù)先設(shè)置好的頻率為止的反應(yīng)時(shí)間作為活性化時(shí)間（Ta或稱onset time），Ta可作為指標(biāo)定量SLP活性化物質(zhì)（PG和β-葡聚糖）。關(guān)于原理，采用Toxinometer^?法的測定事例可見圖4，采用酶標(biāo)儀的測定事例請參見圖5。

 

       在視覺判斷法中，讓其反應(yīng)一定時(shí)間后，通過觀察反應(yīng)液中顏色的變化進(jìn)行判定。這個(gè)方法和在鱟試劑中凝膠化倒轉(zhuǎn)法是一樣的，但由于只需要通過反應(yīng)液的顏色變化進(jìn)行判定而相對簡單，還有不受震動(dòng)的影響等而具有優(yōu)勢。

 

 

● 什么是內(nèi)毒素

● 內(nèi)毒素檢測——鱟試劑的選擇方法

 

【說明書】

SLP Reagent Set	SLP-HS Single Reagent Set SLP-HS

【內(nèi)容】

●SLP試劑套裝

1.SLP試劑
1試管 3mL用
靈敏度：使用視覺判斷法求得終點(diǎn)，標(biāo)記在每批次上。

2.底物試劑
1管 3mL用
含有DOPA

3.底物溶解液１
1管 3mL用
含有優(yōu)質(zhì)緩沖液

●SLP-HS單品試劑套裝

1.SLP-HS(Silkworm Larvae Plasma High Sensitive)
0.2mL用 × 20管
靈敏度 :
10pg/mL (PG)
1pg/mL (凝膠多糖堿溶解液)
（用Toxinometer? (30℃)于100分鐘內(nèi)檢驗(yàn)出）

2.SLP-Diluent
1.0mL用 × 20管
3.Standard(Digested Peptidoglycan from S.aures)
0.5mL用 × 1管

【標(biāo)準(zhǔn)品線性測試及反應(yīng)時(shí)間】

 

【相關(guān)產(chǎn)品】

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	標(biāo)準(zhǔn)	容量
030-09903	凝膠多糖 (※1) Curdlan	生化用	1g
162-18101	肽聚糖 (※2) Peptidoglycan	生化用	2mL
(※1):(1→3)-β-D-葡聚糖 (※2):SLP試劑套裝用、含有1μg/mL來源于Micrococcus luteus的肽聚糖

 

◆ 參考文獻(xiàn)

1. Ashida, M. and Yamazaki, H. I., Biochemistry of the phonoloxidase System in Insects: with Special

    Reference to Its Activation. ''Molting and Metamorphosis,''et. by Onishi, E. and Ishizaki, H., Japan

    Sci. Soc. Press, Tokyo, pp239-265 (1990).

2. Tsuchiya, M., Kobayashi, F., Asahi, N., Yokota, A., and Matsuura, S., Reactivities of Gram-negative

    bacteria and Gram-positive bacteria with Limulus amebocyte lysate and silkworm larvae plasma.,

    J. Endotoxin Res., 1 (suppl. 1), 70 (1994).

3. Tsuchiya, M., Asahi, N., Suzuoki, F., Ashida, M., and Matsuura, S., Detection of peptidoglycan and

    beta-glucan with silkworm larvae plasma test., FEMS Immunol. Med. Microbiol., 15, 129-134 (1996).