新標準　抗體純化樹脂

KANEKA KanCapA™

   

　　

　　本產品為Protein A親和層析樹脂。用于從活體樣本及細胞培養(yǎng)上清純化免疫球蛋白及包含F(xiàn)c段的重組抗體。

　　本產品由高交聯(lián)纖維素微珠及新研發(fā)的耐堿Protein A配體構成，可用于IgG的親和純化。

◆特點

　　?　耐堿

　　?　最佳洗脫條件

　　?　高抗體結合能力

　　?　可循環(huán)使用

　　?　便于擴增

◆關于改良Protein A

　　

　　KanCapA™采用的不是天然Protein A，而是使用變異型C域5聚物的新型Protein A。

　　天然Protein A的C域結合于Fc段，也結合于Fab段，其中與VH3亞家族抗體的反應性較高。該類型的解離需要弱酸條件下洗脫。

　　為改善該問題，使用分子設計系統(tǒng)重新設計分子，研發(fā)了保持耐堿性、改善Fab段的非特異性結合及洗脫曲線的Protein A。

本產品采用的Protein A

1.C5聚體蛋白質		最佳pH條件下清晰地洗脫抗體
2.較高的耐堿性
3.減少Fab段的非特異性結合

◆產品特性

KANEKA KanCapA™　產品特性

矩陣	高交聯(lián)纖維	※ 　　1)　平均粒度為累積體積分布的中間粒度 　　2)　5%動態(tài)結合容量為前端分析測定（停留時間3分鐘） 　　3)　可在強堿條件下清洗，但請避免長時間的清洗 　　4)　請勿冷凍
平均粒度1)	65-85μm
配體	Protein A，重組(抗強堿)
結合	化學結合（還原胺化）
動態(tài)結合容量2)	≧35mg 人多克隆IgG／mL載體
化學穩(wěn)定性3)	使用親和層析通用可溶性溶媒時較穩(wěn)定
pH范圍3)	pH 2-13
靜止清洗條件3)	0.1-0.5 mol/L氫氧化鈉 6-8 mol/L尿素、6 mol/L鹽酸胍
流量	最大500cm/h（層高: 20-25cm）
停留時間	≧3分鐘（建議：4-6分鐘）
保存條件4)	20%乙醇渾濁液，1～10℃

◆應用

1、Fab段　純化應用

　　?　利用KANEKA KanCapA™的特點，可從經木瓜蛋白酶處理后的IgG溶液分餾Fc段及Fab段。

2、IgG洗脫曲線（pH3.5 & pH3.0）

　　?　洗脫范圍已優(yōu)化，可清晰地分餾提純。

3、通過強堿清洗進行樹脂循環(huán)

　　?　進行300次循環(huán)處理后（0.1M氫氧化鈉溶液 15分鐘），IgG的結合容量的減少率仍低于20%，表明其循環(huán)性能較高。

使用0.1 M氫氧化鈉溶液進行循環(huán)處理后的IgG結合活性曲線數(shù)據(jù)

循環(huán)處理后（0.1M氫氧化鈉溶液 15分鐘）的IgG回收率及ProteinA配體的滲濾量的曲線數(shù)據(jù)

4、動態(tài)結合容量　曲線數(shù)據(jù)

　　?　在4-6分鐘停留時間過程中，DBC較高。

　　※　動態(tài)結合容量表示純化樣本在流動的狀態(tài)下，回收程度的數(shù)值。動態(tài)結合容量較高的載體的流速較快，可回收大量目標分子，因此可以認為在短時間內有效純化目標分子的優(yōu)質載體。

　　　　　　　KANEKA KanCapA™的Dynamic Binding Capacity (DBC; 動態(tài)結合容量)　曲線數(shù)據(jù)

5、不同大小的樹脂填充裝柱的壓力/流速繪圖數(shù)據(jù)

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　填充依賴壓力的計算方法是從整體壓力減去系統(tǒng)壓力。

6、KANEKA KanCapA™　于各種大小的柱的填充效果

　　?　KANEKA KanCapA™適用于各種大小的柱。

充填方法	L. D.(cm)	高度(mm)	培養(yǎng)皿/m	非對稱性
流動填充	4.4	200	5710	1.14
軸向力填充	7	199	6063	1.06
流動填充	10	201	5276	1.18
流動填充	30	200	5208	1.17
軸向力填充	45	233	4712	1.09

以下是脈沖注入數(shù)據(jù)：

　　可溶性溶媒：1(v/v)% 丙酮

　　注入量：1% 柱容量

　　流速：60 cm/h

相關資料：

抗體純化樹脂說明書

抗體純化樹脂.pdf

參考文獻

使用Kaneka KanCapA純化單克隆抗體

使用該Kaneka KanCapA^TM從CHO細胞培養(yǎng)上清中純化單克隆抗體