可用于iPS細(xì)胞的冷凍保存！

培養(yǎng)細(xì)胞凍存液COS banker系列

　　COS banker是不含血清和牛來源化合物的安全培養(yǎng)細(xì)胞凍存液。

　　COS banker II是為了保存過繼免疫淋巴細(xì)胞而開發(fā)的淋巴細(xì)胞凍存液。

 

◆特點(diǎn)

●　可以冷凍保存iPS細(xì)胞。

●　無需稀釋使用。

●　復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率優(yōu)異。

●　"COS banker"不含動(dòng)物的血清以及其他動(dòng)物源成分。^＊1

●　為了防止其中的DMSO腐蝕PET容器，特意采用玻璃裝瓶。

*1  "COS banker II"含有GMP級(jí)人血清白蛋白的穩(wěn)定劑。

 

◆實(shí)驗(yàn)步驟

1.    以轉(zhuǎn)速1200rpm/5min對(duì)處于對(duì)數(shù)期^*2的細(xì)胞進(jìn)行離心操作，然后收集大約5×10⁵~1×10⁷個(gè)離心后的細(xì)胞。

2.    向細(xì)胞沉淀中添加1mL本產(chǎn)品，進(jìn)行重懸后放進(jìn)凍存管中，在-80°C冷凍保存。

3.    用液氮儲(chǔ)存時(shí)，細(xì)胞請(qǐng)預(yù)先在-80°C下冷凍1天以上。

4.    復(fù)蘇操作請(qǐng)?jiān)?7°C的恒溫水浴鍋中快速進(jìn)行。

*2 凍存的細(xì)胞需位于對(duì)數(shù)期，這點(diǎn)對(duì)于提高復(fù)蘇后的存活率至關(guān)重要。

 

◆規(guī)格

產(chǎn)品名稱	COS banker	COS banker II
產(chǎn)品編號(hào)	COS-CFM01	COS-CFM02
產(chǎn)品包裝	120mL	120mL
成分	含DMSO（含量不公開）  不含血清	含DMSO（含量不公開） 含人血清白蛋白 不含血清
儲(chǔ)存方法	低溫避光保存（2~8°C）	低溫避光保存（2~8°C）
有效期	生產(chǎn)后2年	生產(chǎn)后2年

◆質(zhì)量控制

檢查項(xiàng)目	測(cè)試方法	標(biāo)準(zhǔn)
無菌性	TGC、SCD以及培養(yǎng)法（日本藥典）	不生長(zhǎng)
內(nèi)毒素	動(dòng)力學(xué)比色法（日本藥典）	0.3 EU/ｍL 以下
細(xì)胞保存性	冷凍7天后重新復(fù)蘇的細(xì)胞生存	與對(duì)照凍存液相同

◆使用例子

COS banker	iPS細(xì)胞（Dotcom）、
	Daudi（人伯基特淋巴瘤）、HeLa S3（人宮頸癌）、
	K562（人慢性骨髓性白血?。?、Raji（人伯基特淋巴瘤）、
	MOLT-4（人急性淋巴細(xì)胞白血病 : T- 細(xì)胞）、
	CTLL-2（小鼠T : IL-2 依賴性）、NIH/3T3（小鼠胎兒）、
	PC-12（大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤）、CHO-K1（中國(guó)倉鼠卵巢）、
	Vero細(xì)胞（非洲綠猴腎來源細(xì)胞株）、
	MDCK細(xì)胞（犬腎小管上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞株）
	MCF-7（人乳癌） 、HepG2（人肝癌）、
	P3U1（小鼠骨髓瘤）、成纖維細(xì)胞、
	表皮角化細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、雜交瘤、SF9（昆蟲細(xì)胞）
COS   banker II	人末梢血來源活化淋巴細(xì)胞、
	Daudi細(xì)胞、Raji細(xì)胞、K652細(xì)胞、
	Molt-4F細(xì)胞、CTLL-2細(xì)胞、MCF-7（人乳癌）、
	HepG2（人肝癌）、P3U1（小鼠骨髓瘤）、
	成纖維細(xì)胞、表皮角質(zhì)形成細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、
	雜交瘤、CHO細(xì)胞（中國(guó)倉鼠卵巢來源細(xì)胞株）、
	MDCK細(xì)胞（犬腎小管上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞株）、HeLa（人宮頸癌）、SF9（昆蟲細(xì)胞）

◆iPS細(xì)胞

【冷凍保存程序（緩慢凍結(jié)法）】

●　用CTK溶液回收細(xì)胞

●　離心（1000rpm，5分鐘），除去上清液

●　添加COS banker，重懸細(xì)胞

●　分裝到凍存管中

●　將凍存管放入凍存盒中。

●　置于-80℃的超低溫冰箱中

●　次日將凍存管移至液氮中

圖1 iPS細(xì)胞（Dotcom）的凍存結(jié)果

左：復(fù)蘇后第二天、   右：復(fù)蘇后第六天

 

◆人淋巴細(xì)胞

圖2 （左圖）不同細(xì)胞凍存液的細(xì)胞存活率比較

添加0.5mL細(xì)胞（活細(xì)胞濃度 3×10⁶ cells/mL）至凍存管，并儲(chǔ)存在-80°C中。一周/一個(gè)月/兩個(gè)月后復(fù)蘇（在37°C恒溫水槽中孵育90秒，剩余的冷凍細(xì)胞搖晃融解），測(cè)量存活率。

灰：一周后、 藍(lán)：一個(gè)月后、 黑：2個(gè)月后

 

圖3（右圖）復(fù)蘇后的細(xì)胞增殖情況

復(fù)蘇凍存了一周的淋巴細(xì)胞，將各個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞濃度調(diào)至20×104cells/mL，在水浴鍋中培養(yǎng)。對(duì)第5天及第6天的活細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

◆產(chǎn)品列表

COS banker

不含血清和牛來源化合物的安全培養(yǎng)細(xì)胞凍存液。

產(chǎn)品編號(hào)	制造商	產(chǎn)品名稱	包裝
COS-CFM01	KOJ	COS banker [Cell Freezing Medium] (chemical defined) COS banker [細(xì)胞凍存液] （化學(xué)成分明確）	120mL

COS banker II

為了保存過繼免疫淋巴細(xì)胞而開發(fā)的淋巴細(xì)胞凍存液。

產(chǎn)品編號(hào)	制造商	產(chǎn)品名稱	包裝
COS-CFM02	KOJ	COS banker II [Cell Freezing Medium] COS banker II [細(xì)胞凍存液]	120mL