組織培養(yǎng)用膠原蛋白

Cellmatrix^? Series

　　Cellmatrix是作為組織培養(yǎng)膠原蛋白開發(fā)的?？珊唵卧佻F(xiàn)各種需要使用膠原蛋白的培養(yǎng)方法。

◆優(yōu)勢、特色

Cellmatrix? Type I-A

●　豬腱由來，酸可溶性的Type-I膠原蛋白

●　濃度3.0mg/ml、pH3的無菌溶液

●　高凝膠強度，最適合膠原蛋白?凝膠包埋培養(yǎng)

●　凝膠的透明度高，容易顯微鏡觀察

Cellmatrix^? Type I-C

●　豬皮由來的胃蛋白酶可溶化的Type-I膠原蛋白

●　濃度3.0mg/ml、 pH3的無菌溶液

●　低粘度，最適合包被

●　幾乎不會凝膠化

Cellmatrix^? Type I-P

●　豬腱由來的胃蛋白酶可溶化的Type-I膠原蛋白

●　濃度3.0mg/ml、pH3的無菌溶液

●　粘性低、容易處理

●　形成凝膠

Cellmatrix^? Type Ⅲ

●　用胃蛋白酶處理豬皮精制的Type-Ⅲ膠原蛋白

●　濃度3.0mg/ml、pH3的無菌溶液

●　最適合包被

●　幾乎不會凝膠化

Cellmatrix^? Type Ⅳ

●　用胃蛋白酶處理牛晶狀體前囊精制的Type-Ⅳ膠原蛋白

●　低粘度、最適合包被

●　濃度3.0mg/ml、pH3的無菌溶液

●　不會凝膠化

◆應(yīng)用

【Type I-A】

　　經(jīng)膠原蛋白、凝膠包埋培養(yǎng)的小鼠乳腺癌細胞增殖形態(tài)

　　Cellmatrix Type I-A具有高凝膠強度

【Type I-P】

　　Cellmatrix Type I-P可形成比較軟的凝膠

【Type I-C】

　　培養(yǎng)細胞的伸展活性

　　　　　

　未涂布　　　　　　　　涂布膠原蛋白

【相關(guān)資料】

Nitta-Gelatin Product Guide_en

膠原蛋白凝膠培養(yǎng)方法

事前準備

膠原蛋白凝膠上培養(yǎng)

膠原蛋白凝膠包埋培養(yǎng)

膠原蛋白涂層法

Q：    請告知明膠蛋白和明膠的差異。為什么明膠在4℃做凝膠，膠原蛋白在37℃做凝膠?

A：    明膠是膠原蛋白的變性產(chǎn)物，具體地說，膠原蛋白是三股螺旋纏繞的結(jié)構(gòu)，分子量為30萬道爾頓，經(jīng)熱等因

          素而被破壞，形成無規(guī)則線圈結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)為明膠。

          所以明膠和膠原蛋白，一級結(jié)構(gòu)（氨基酸組成）相同，二級結(jié)構(gòu)不同。這個差異反映了膠原蛋白和明膠產(chǎn)生

          凝膠的條件差異。

          膠原蛋白保持三股螺旋纏繞的結(jié)構(gòu)，在螺旋結(jié)構(gòu)外側(cè)排列著疏水性氨基酸——脯氨酸。膠原蛋白凝膠利用這

          個疏水性氨基酸，通過<溫度高的一方，具有高結(jié)合力>疏水結(jié)合，制備明膠。

          而明膠二級結(jié)構(gòu)被破壞，親水性氨基酸在外側(cè)排列，通過氫結(jié)合和離子結(jié)合制作凝膠。

          當(dāng)溫度高時，<氫結(jié)合力+離子結(jié)合力>克服明膠主鏈的熱運動，不形成凝膠。但是，當(dāng)變?yōu)榈蜏貢r，<氫結(jié)合

          力+離子結(jié)合力>成為熱運動力量，明膠形成凝膠。

  

 

Q：    用明膠凝膠是否能培養(yǎng)？

A：    用明膠凝膠不能培養(yǎng)。明膠凝膠在37℃的培養(yǎng)條件下不會形成凝膠，將會溶化。

          在組織培養(yǎng)液中，明膠的用途一般為：在培養(yǎng)皿中進行明膠涂層培養(yǎng)，或在明膠海綿上用福爾馬林等進行橋

          聯(lián)培養(yǎng)。

  

 

Q：    想購買膠原蛋白凝膠，是否有？

A：    以膠原蛋白溶液的狀態(tài)作為商品銷售。可根據(jù)附送的手冊，進行膠原蛋白凝膠制作。

          請將Cellmatrix Type I-A作為膠原蛋白凝膠培養(yǎng)產(chǎn)品，進行訂購。為第一次做膠原蛋白凝膠培養(yǎng)法的顧客，

          準備了制作凝膠所必須的試劑套裝和膠原蛋白凝膠培養(yǎng)試劑盒。

  

 

Q：    為什么溶解于酸性溶液的膠原蛋白能進行培養(yǎng)？

A：    實際上，在膠原蛋白包埋細胞前，需要將酸性的膠原蛋白溶液調(diào)整成中性。

          調(diào)整后的膠原蛋白因為低溫保持者溶液狀態(tài)，以這個狀態(tài)將細胞懸液混合到膠原蛋白溶液中。

          之后，將含有這個細胞的膠原蛋白溶液移到培養(yǎng)皿中，在37℃中加熱，膠原蛋白以細胞包埋狀態(tài)形成凝膠。

          這個就是膠原蛋白凝膠包埋培養(yǎng)法的制作方法。

          詳細請參考在線手冊。

  

 

Q：    Cellmatrix有很多的膠原蛋白種類，應(yīng)該選哪個才好？

A：    根據(jù)目的不同，變化使用的種類。

          根據(jù)主要目的，將產(chǎn)品系列分成如下種類，請參考。

          膠原蛋白凝膠培養(yǎng)試劑盒、Cellmatrix Typr I-A、Cellmatrix TypeI-P適合膠原蛋白凝膠培養(yǎng)法。

          其他的Cellmatrix（Cellmatrix Type I-C，III，IV）不能進行膠原蛋白凝膠培養(yǎng)。

          Cellmatrix Type I-C適合標準的涂層培養(yǎng)法——膠原蛋白涂層培養(yǎng)法。請根據(jù)客人實驗的細胞及方法，考慮

          最適合的Cellmatrix ，實驗性地考慮其他類型的膠原蛋白。例如，軟骨細胞使用Cellmatrix Type II等，表皮

          細胞使用Cellmatrix Type IV等。

 

  

Q：    為何膠原蛋白凝膠比瓊脂凝膠的培養(yǎng)效率好？

A：    請讓我簡單地說明瓊脂培養(yǎng)法和膠原蛋白凝膠培養(yǎng)法的差異。

          被包埋在膠原蛋白凝膠內(nèi)的細胞，在膠原蛋白基質(zhì)上以貼壁的狀態(tài)進行增殖。         .

          可是，被瓊脂包埋的細胞，在瓊脂基質(zhì)上以未貼壁狀態(tài)進行增殖。所以，貼壁依賴性細胞在膠原蛋白凝膠中

          進行細胞增殖，在瓊脂內(nèi)不進行細胞增殖。

          有報告指出：貼壁依賴性比較低的癌細胞，采用膠原蛋白凝膠培養(yǎng)法比采用瓊脂培養(yǎng)法，顯示高倍數(shù)的克隆

          形成率。

          有眾多報告指出：膠原蛋白凝膠法對細胞增殖、細胞分化的誘導(dǎo)、形態(tài)形成等有效。

          關(guān)于膠原蛋白凝膠培養(yǎng)法的詳細報告，請參考主頁的論文介紹。

 

 

Q：    膠原蛋白凝膠包埋培養(yǎng)法和膠原蛋白、涂層培養(yǎng)法，有什么不同？

A：    膠原蛋白凝膠包埋培養(yǎng)法是在膠原蛋白凝膠內(nèi)做細胞包埋，進行細胞培養(yǎng)的方法。

          被包埋到膠原蛋白內(nèi)的細胞，和體內(nèi)一樣進行三維增殖。

          膠原蛋白涂層培養(yǎng)法是在培養(yǎng)皿上做膠原蛋白薄涂層，然后再上面進行細胞培養(yǎng)的方法，細胞呈單層增殖。

          綜上所述，膠原蛋白凝膠包埋培養(yǎng)法是作為細胞外基質(zhì)，利用膠原蛋白的三維培養(yǎng)法：膠原蛋白涂層培養(yǎng)法

          是利用膠原蛋白作為細胞吸附因子的二維培養(yǎng)法（單層培養(yǎng)法）。

 

  

Q：    想進行膠原蛋白凝膠培養(yǎng)發(fā)，應(yīng)該選哪種Cellmatrix才好？

A：    請選Cellmatrix Type I-A。還有為初學(xué)者準備的，含有制作膠原蛋白凝膠全部試劑的膠原蛋白凝膠培養(yǎng)試劑

          盒。

          建議第一次使用的人購買這個膠原蛋白凝膠培養(yǎng)試劑盒。

 

 

Q：    想進行膠原蛋白、涂層培養(yǎng)防法，應(yīng)該選哪種Cellmatrix才好？

A：    請選Cellmatrix Type I-C。Cellmatrix Type I-C具有低粘度，處理容易，最適合標準膠原蛋白涂層培養(yǎng)法。

          根據(jù)細胞種類和培養(yǎng)條件的不同，也能得到更好的適合細胞的膠原蛋白涂層。

          例如，表面細胞可使用Cellmatrix Type IV膠原蛋白等。請進行實驗研討。

  

 

Q：    想學(xué)習(xí)膠原蛋白培養(yǎng)法，請介紹合適的論文。

A：    詳細請參考在線手冊。

          該手冊詳細地介紹了：所謂的膠原蛋白是什么、膠原蛋白培養(yǎng)法的效果、膠原蛋白培養(yǎng)發(fā)的具體方法等。

          關(guān)于論文，請參考主頁的論文介紹項目。

  

 

Q：    請具體地告知膠原蛋白、凝膠包埋培養(yǎng)方法。

A：    將作為酸性溶液的膠原蛋白溶液Cellmatrix Type I-A調(diào)整成中性。

          調(diào)整后的膠原蛋白因為低溫，保持著溶液狀態(tài)，以這個狀態(tài)將細胞懸濁液混合到膠原蛋白溶液中。之后江漢

          油田這個細胞的膠原蛋白溶液移到培養(yǎng)皿中，在37℃中加熱，膠原蛋白以細胞包埋狀態(tài)形成凝膠。

          關(guān)于詳細 ，請參考在線手冊。

 

 

Q：    請具體地告知膠原蛋白涂層的方法。

A：    將Cellmatrix Type I-C用稀鹽酸（pH3.0，約10-3M）稀釋10倍以上，放入培養(yǎng)皿中，在室溫中靜置

          30~60分鐘。

          靜置后，攝取膠原蛋白溶液，以常溫、無菌狀態(tài)干燥培養(yǎng)皿。干燥后，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2次，加入細胞懸

          液，進行普通培養(yǎng)。

  

 

Q：    進行膠原蛋白涂層時，向培養(yǎng)皿注入多少量的膠原蛋白溶液才好？

A：    膠原蛋白溶液注入量為均勻覆蓋培養(yǎng)皿底面即可。

          以1ml/10cm2比例為標準

 

Q：    Cellmatrix Type IV是否能進行包埋培養(yǎng)？

A：    單獨使用Cellmatrix Type IV膠原蛋白不能進行包埋培養(yǎng)。眾多膠原蛋白中只有I型膠原蛋白具有凝膠化能力。

          若想研究在包埋培養(yǎng)下的IV型膠原蛋白與細胞的互相作用，請混合I型膠原蛋白IV型膠原蛋白。Cellmatrix 

          Type I和Cellmatrix Type IV的混合比例，在1:2~2:1范圍為好。

          混合比例與膠原蛋白凝膠強度的關(guān)系，請參考本公司手冊<使用膠原蛋白的細胞培養(yǎng)法>。

  

 

Q：    所謂的膠原蛋白是不是培養(yǎng)基？

A：    膠原蛋白不是培養(yǎng)基。所謂的膠原蛋白是培養(yǎng)基的基質(zhì)。

          膠原蛋白凝膠是在培養(yǎng)基中作為整體結(jié)構(gòu)支撐體的膠原蛋白組織，相當(dāng)于生物體中的血液。

          在體外的細胞作為膠原蛋白的細胞外基質(zhì)存在。

          將膠原蛋白作為培養(yǎng)基質(zhì)使用的膠原蛋白凝膠包埋培養(yǎng)，旨在重現(xiàn)生物內(nèi)環(huán)境的狀態(tài)。

  

 

Q：    請告知膠原蛋白的稀釋方法。

A：    用pH3.0稀鹽酸稀釋。因為膠原蛋白具有高粘性，使用像試管一樣的細小容器比較難稀釋，使用三角燒瓶或離

          心管（例如：50mL培養(yǎng)用塑料離心管等）等粗的容器比較容易稀釋。

          三角燒瓶，像畫圓一樣搖晃10次左右：離心管，來回顛倒10次左右，進行攪拌稀釋。如果，出現(xiàn)起泡，可靜

          置一晚后使用，或以低速離心分離（1500rpm，3min）脫氣后使用。

          同時，開發(fā)了膠原蛋白、涂層培養(yǎng)用低粘度型的Cellmatrix Type I-C?？梢黄鹩懻?。

  

 

Q：    pH3.0鹽酸是多少摩爾值？請告知制作方法。

A：    pH鹽酸是10-3摩爾/升。因為鹽酸是強酸，濃度基本合適，調(diào)整好pH儀表，早可快遞、正確地制作。

          例如，一邊用pH儀表測量，一邊用巴斯德移液管一滴一滴向100mL蒸餾水中加入1N的鹽酸。

          pH3.0鹽酸制成后，請以高壓滅菌或過濾滅菌。