不動桿菌屬菌,醫(yī)療環(huán)境,包括自然環(huán)境中廣泛存在的機會感染細菌。另外,抗菌藥耐藥性不動桿菌屬菌高度表現也包含監(jiān)視,醫(yī)療相關感染的對策上重要。
名古屋大學的荒川先生及愛知縣衛(wèi)生研究所的鈴木老師所開發(fā)的PCR -根據ORF Typing(POT法)中,多路聚合酶鏈反應,用不動桿菌屬菌保有多數特定基因領域進行放大,瓊脂糖凝膠電泳法而被分離的樂隊模式的數值化,菌種簡易鑒定及A . baumannii的菌株識別和國際流行克隆的識別。
*本試驗法,厚生労働科學研究費補助金新興·復興對感染癥的創(chuàng)新醫(yī)藥品等開發(fā)推進事業(yè)(H 24 -新興-一般- 010)開發(fā)的東西。
特長
菌種簡易鑒定(<em>A . baumannii</em>,<em>A . pittii</em>,<em>A . nosocomialis</em>,A . sp . close to 13 TU)可能
<em>A . baumannii</em>菌株能夠識別
<em>A . baumannii</em>的國際流行克?。ㄎ⑿强萍糲loneⅠ、Ⅱ)能夠識別
Multilocus Sequence Typing(MLST)法和幾乎同等的識別能力
配套元件的構成(30回)
|
個別名稱 |
容量 |
數量 |
試劑A |
AptaTaq DNA主人(5×Conc .)* |
240μL |
一本書 |
試劑B |
PCR附錄 |
240μL |
一本書 |
試劑C |
引物混合α |
120μL |
一本書 |
試劑D |
混合β引物 |
120μL |
一本書 |
試劑E |
積極控制 |
240μL |
一本書 |
試劑F |
6×裝入緩沖區(qū)(BPB·XC) |
240μL |
一本書 |
* AptaTaq DNA主人(5×Conc設置Roche Diagnostics K . K .的商品。
操作步驟
① |
分離的菌株純培養(yǎng) |
② |
DNA抽出,進行模板DNA制備 |
③ |
兩種多路PCR |
④ |
瓊脂糖凝膠電泳 |
⑤ |
樂隊的讀取模式 |
差 |
POT值的計算 |
⑦ |
各樣品的POT值的比較分析 |
解析
電泳模式
50 : 50個基點DNA梯形電腦:積極的控制1,2:A . baumannii(ST 2)同一事例得到的臨床分離股票3:A . baumannii(ST 2)4:A . baumannii(ST 2)多藥耐藥性A . baumannii
5:A . baumannii(ST 1)ATCC?BAA 16056:A . baumannii(ST 1)7:A . baumannii(ST 152)8:A . baumannii(ST 34)9:A . pittii10:A . nosocomialis11:<em>A .</em>close to sp .A . nosocomialis
名古屋大學的荒川宜親老師和愛知縣衛(wèi)生研究所匡弘鈴木老師的厚意,通過電泳模式的實例數據為您提供領受了。
檢測ORF的種類(目標區(qū)域)及其PCR擴增產物尺寸
|
POT No . |
放大尺寸(bp) |
目標領域 |
Reactionmixture 1 |
PCR PC |
553 |
atpA |
A . baumannii |
465 |
OXA – 51 |
A . pittii |
401 |
Specific gene |
A . nosocomialis |
362 |
Specific gene |
<em>A .</em> sp close TU to 13 . |
321 |
Specific gene |
POT 1 – 1 |
271 |
Genomic Islet – 1 |
POT 1 – 2 |
231 |
Genomic Islet – 2 |
POT 1 – 3 |
189 |
Genomic Islet – 3 |
POT 1 – 4 |
151 |
Genomic Islet – 4 |
POT 1 – 5 |
122 |
Genomic Islet – 5 |
POT 1 – 6 |
102 |
Genomic Islet – 6 |
POT 1 – 7 |
81 |
Genomic Islet – 7 |
Reactionmixture 2 |
PCR PC |
565 |
OXA – 51 |
POT 2 – 1 |
457 |
Genomic Island – 1 |
POT 2 – 2 |
388 |
Genomic Island – 2 |
POT 2 – 3 |
329 |
Genomic Island – 3 |
POT 2 – 4 |
280 |
Genomic Island – 4 |
POT 2 – 5 |
237 |
Genomic Island – 5 |
POT 2 – 6 |
公元209 |
Genomic Island – 6 |
POT 3 – 1 |
185 |
Genomic Island – 7 |
POT 3 – 2 |
160 |
Genomic Island – 8 |
POT 3 – 3 |
139 |
Genomic Island – 9 |
POT 3 – 4 |
120 |
Genomic Island – 10 |
POT 3 – 5 |
101 |
Genomic Island – 11 |
POT 3 – 6 |
81 |
Genomic Island : 12 |
①2個多路PCR的電泳結果從樂隊讀取模式。
②這電泳樂隊的有無的結果用,POT值分析用EXCEL表二進法輸入,3個類別的POT值計算出。
無論PCR電腦陽性的情況,那個樣品已不動桿菌屬菌,可以確認。
不論POT值1 1000以下的話A . baumannii,1000以上2000以下的話A . pittii,2000以上3000以下的話A . nosocomialis3000以上,4000以下的話A .close to 13 TU sp .,4000以上的話不動桿菌屬菌的細菌種類不明,被判定。
在樣品之間的POT值進行比較,A . baumannii菌體間的相同性客觀的推測。
興趣集體感染得菌身體,POT 1~3的POT值全部同一。
范疇 |
樣品號碼 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
POT 1 |
122 |
122 |
122 |
122 |
69 |
69 |
72 |
104 |
1105 |
2105 |
3105 |
POT 2 |
59 |
59 |
26 |
53 |
46 |
42 |
0 |
8 |
0 |
0 |
0 |
POT 3 |
54 |
54 |
54 |
41 |
59 |
27 |
8 |
0 |
0 |
0 |
0 |
產品信息
產品名 |
包裝 |
產品編號 |
鹿genius?分子疫學分析POT配套元件(不動桿菌屬菌用) |
一包(30回) |
08062 – 96 |
鹿genius?DNA抽出試劑 |
一包(120次) |
08178 – 96 |
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書是愛知縣套件★和名古屋大學專利許可,制造銷售。★其他廠商的商品有關的許可證、專利方面,各廠商請確認。★產品規(guī)格,產品改良而變更。請您事先了承。
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gel lanes 250 |
49914 : 40 |
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2 mL×6本 |
24080 – 96 |
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宣傳手冊、說明書(PDF)
小冊子鹿genius?分子疫學解析配套元件(不動桿菌屬菌用)(386 KB)
小冊子鹿genius?POT套件系列(1.3 MB)
小冊子鹿genius?基因檢測試劑盒推薦組套(978 KB)設備
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取扱說明書(598 KB)
計算表(ZIP文件,Excel)
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