腹瀉原性大腸菌（Diarheageniccoli E .），人類腹痛、腹瀉癥引起大腸桿菌的總稱，性質(zhì)和癥狀的不同，7種被分類。本試劑盒，多路PCR遺傳基因放大，其擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行確認(rèn)，在日本主要被報(bào)告的5種的致病基因的保有狀況確認(rèn)。
特長
三種混合用底漆，腸管病原性大腸菌（EPEC），腸管出血性大腸菌（EHEC），腸道毒素性大腸菌（ETEC），腸管侵入性大腸菌（EIEC），腸管凝集性大腸菌（EAEC）的病原性有關(guān)的遺傳基因可檢測(cè)
檢測(cè)結(jié)果數(shù)值化，從而容易判定可能
配套元件的構(gòu)成
|
個(gè)別名稱 |
容量 |
數(shù)量 |
| 試劑A |
AptaTaq DNA主人（5×Conc .）* |
1.2毫升 |
一本書 |
| 試劑B |
PCR附錄 |
1.1毫升 |
一本書 |
| 試劑C |
引物混合1 |
0.4毫升 |
一本書 |
| 試劑D |
引物混合2 |
0.4毫升 |
一本書 |
| 試劑E |
引物混合3 |
0.4毫升 |
一本書 |
| 試劑F |
積極控制 |
0.4毫升 |
一本書 |
| 試劑G |
6×裝入緩沖區(qū)（BPB·XC） |
1.2毫升 |
一本書 |
* AptaTaq DNA主人（5×Conc設(shè)置Roche Diagnostics K . K .的商品。
操作步驟
| 增菌、分離培養(yǎng) |
大腸菌分離的 |
| DNA抽出 |
鹿genius?DNA抽出試劑使用DNA模板調(diào)制 |
| PCR |
3種多路PCR進(jìn)行 |
| 電泳 |
3%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行 |
| 檢測(cè) |
溴化乙錠溶液檢測(cè)PCR檢測(cè)，片段 |
| 判定 |
專用的計(jì)算表結(jié)果輸入，病原型的進(jìn)行判斷 |
解析
電泳模式
100 : 100個(gè)基點(diǎn)DNA梯形P：積極的控制1：ATCC?35150（EHEC）2：ATCC?43887（EPEC）3：ATCC?35401（ETEC）4：ATCC?43893（EIEC）5：ATCC?25922（非病原性大腸菌）6～10：臨床分離股票
泳動(dòng)條件，3%瓊脂糖KANTO A的酒館熊貓聚會(huì)（1×TBE緩沖液），Mupid – exU運(yùn)用，100伏35分鐘。13孔的梳子，用樣品8μL電器了泳動(dòng)了。
*使用了瓊脂糖凝膠，一張凝膠13孔梳子3個(gè)刺制作著。
|
|
樣品號(hào)碼 |
| 1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
| 系數(shù)的合計(jì)值 |
97 |
1 |
24 |
4 |
0 |
97 |
1 |
24 |
16 |
2 |
| 病原型的判定 |
EHEC |
EPEC |
ETEC |
EIEC |
其他 |
EHEC |
EPEC |
ETEC |
ETEC |
EAEC |
檢測(cè)基因和其PCR擴(kuò)增產(chǎn)物尺寸
|
系數(shù) |
放大尺寸（bp） |
目標(biāo)領(lǐng)域 |
| Reactionmixture 1 |
1 |
速率 |
eaeA |
| 32 |
132 |
stx 1 |
| 64 |
93 |
stx 2 |
| Reactionmixture 2 |
16 |
130 |
est |
| 8 |
62 |
elt |
| Reactionmixture 3 |
2 |
575 |
aggR |
| 4 |
可以 |
invE |
| 內(nèi)標(biāo)控制 |
120 |
rDNA 16 s |
* <em>InvE</em>基因，質(zhì)粒上有侵入性基因的緣故，脫落的情況。
①3個(gè)多路PCR的電泳結(jié)果從樂隊(duì)讀取模式。
②這電泳樂隊(duì)的有無的結(jié)果用，分析用EXCEL表二進(jìn)法輸入，病原型的判定進(jìn)行。
③16 s rDNA陽性的情況，大腸桿菌的估計(jì)。
合計(jì)點(diǎn)和腹瀉原性大腸菌的病原型
| 合計(jì)點(diǎn) |
病原型 |
| 0 |
EHEC / STEC，EPEC，ETEC，EIEC，EAEC以外的大腸菌或必須是近親的微生物 |
| 1 |
EPEC |
| 2 |
EAEC |
| 4～7 |
EIEC |
| 8～11 |
ETEC（+）<em>elt</em> |
| 16～19 |
ETEC（+）<em>est</em> |
| 24～27 |
ETEC（<em>est</em> +、<em>elt</em> +） |
| 32～35 |
EHEC / STEC（+）<em>stx 1</em> |
| 64～67 |
EHEC / STEC（+）<em>stx 2</em> |
| 96～99 |
EHEC / STEC（<em>stx 1</em> +、<em>stx 2</em> +） |
| 上述以外 |
混合被懷疑感染 |
* EIEC和痢疾桿菌區(qū)別不能。合計(jì)點(diǎn)36的情況，志賀痢疾桿菌的可能性被懷疑。stx（＊2志賀毒素2基因型地產(chǎn)生），根據(jù)變體檢測(cè)不能的情況。例）stx 2f
產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品名 |
包裝 |
產(chǎn)品編號(hào) |
| 鹿genius?致病基因檢測(cè)試劑盒（PCR腹瀉原性大腸菌用） |
一包（100次） |
08087 – 96 |
| 鹿genius?DNA抽出試劑 |
一包（120次） |
08178 – 96 |
最新的價(jià)格是Cica – Web請(qǐng)參照。
其他廠家的商品相關(guān)的許可證、專利方面，各廠商請(qǐng)確認(rèn)。
的相關(guān)產(chǎn)品
POT套件·PCR套件
最新的價(jià)格是Cica – Web請(qǐng)參照。
分離培養(yǎng)基
| 產(chǎn)品名 |
包裝 |
產(chǎn)品編號(hào) |
| 黑藻アガーSTEC生培養(yǎng)基 |
10張 |
72090 |
最新的價(jià)格是Cica – Web請(qǐng)參照。
電泳相關(guān)
| 產(chǎn)品名 |
包裝 |
產(chǎn)品編號(hào) |
| 瓊脂糖KANTO A的酒館熊貓聚會(huì)了 |
100克 |
01089 – 23 |
| 10×TBE緩沖液 |
一L |
46510 : 79 |
| 溴化乙錠溶液（2毫克/毫升瓶裝），眼藥水 |
10毫升 |
14575 : 43 |
| Quick‐Load 100個(gè)基點(diǎn)DNA Ladder |
gel lanes 125 |
49881 – 04 |
| TriDye 100個(gè)基點(diǎn)DNA Ladder |
gel lanes 125 |
49881 – 60 |
| 6倍濃縮裝入緩沖器 |
2 mL×6本 |
24080 – 96 |
最新的價(jià)格是Cica – Web請(qǐng)參照。
參考文獻(xiàn)
1）公立大學(xué)法人大阪市立大學(xué)，KALS株式會(huì)社，株式會(huì)社二共刃型工業(yè)；“腹瀉原性大腸桿菌檢測(cè)方法”，專利公開2008 – 283895
2）Ruttler，M . E .el at您Biocell您30（2）: 301 – 308，2006
3）Hiroe，Aet al您Appl，Environ，Microbiol您78（9）：3177 – 3184，2012
宣傳手冊(cè)、說明書（PDF）
小冊(cè)子鹿genius?病原基因檢測(cè)PCR配套元件（腹瀉原性大腸菌用）（436 KB）
小冊(cè)子基因檢測(cè)相關(guān)產(chǎn)品指南（2.3 MB）
取扱說明書（390 KB）
計(jì)算表（ZIP文件，Excel）
分析用EXCEL表
的相關(guān)產(chǎn)品
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