原裝進(jìn)口-蛋白肽測序試劑-質(zhì)譜級(jí)賴胺酰肽鏈內(nèi)切酶

原裝進(jìn)口-蛋白肽測序試劑-質(zhì)譜級(jí)賴胺酰肽鏈內(nèi)切酶
125-05061 現(xiàn)貨促銷 【活動(dòng)期限:即日起至2018/2/10】

【詳細(xì)說明】

原裝進(jìn)口-蛋白肽測序試劑-質(zhì)譜級(jí)賴胺酰肽鏈內(nèi)切酶

125-05061 現(xiàn)貨促銷 【活動(dòng)期限:即日起至2018/2/10】

本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時(shí)最常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶,該酶可以特異性切除賴氨酸基團(tuán) C 末端 的多肽,可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同時(shí)使用賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶和胰酶,可更好地切斷賴氨酸 基團(tuán)的多肽,增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。

來源:細(xì)菌

外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl緩沖液,pH 8)

活性:0.03~0.07AU/vial

分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)

溶解性:溶于水或緩沖液

穩(wěn)定性:溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中,可在4℃穩(wěn)定保存2年;在pH值6.0-11.0 30℃時(shí)能穩(wěn)定保存,但溫度超過50℃時(shí)不穩(wěn)定。

最適pH值:9.0~9.5

等電點(diǎn):6.9~7.0

底物特異性:

可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA

抑制劑:DFP,PMSF,TLCK

 

◆特點(diǎn)

blob.png●??高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析

●??提高裂解效率、增加肽段數(shù)量

●??根據(jù)使用量特意制備小包裝,方便使用

 

 

◆應(yīng)用

分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶(Lep) 和Tp 與Lep聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)酶切的效果比較。

牛血清蛋白BSA 的條帶(100ng) 通過SDS-PAGE 獲得,然后分別用Tp、Lep 和Lep+Tp 進(jìn)行酶切,再用MALDI-TOFMS 法進(jìn)行分析。

這些蛋白酶的實(shí)驗(yàn)效果見下表。

表 1:Tp、Lep 和 Lep+Tp 的結(jié)果對(duì)照

這些結(jié)果表明 Lep 酶解的錯(cuò)誤裂解率最低。Tp 酶解時(shí)加入 Lep 后,錯(cuò)誤裂解率有所降低,同時(shí),可以鑒定出更多的多肽。

Tp Lep Lep +Tp
裂解位點(diǎn) 精氨酸和賴氨酸的C端 賴氨酸的C端 精氨酸和賴氨酸的C端
錯(cuò)誤裂解率

( ?錯(cuò)誤裂解所占比例 ?)

多(8%) 很少(0%) 少(3%)
鑒定出的多肽數(shù)量 17 19 22

 

blob.png

胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lep)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。

Lep+Tp酶切后,可以在m/z=2000時(shí)得到吸收峰,而單獨(dú)的Tp酶切在m/z=2000時(shí)沒有吸收峰。該結(jié)果表明Lep可以提高測序覆蓋度。

( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )

 

賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶

賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶,最初由Masaki 等人從土壤細(xì)菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵,用于蛋白測序和Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩(wěn)定性高,在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時(shí)之后,仍然擁有完整的生物活性。

外觀 凍干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8) 活性 見包裝
分子量 27,000(凝膠過濾);30,000 (SDS-PAGE) 溶解性 易溶于水或緩沖液
最佳pH 9.0-9.5(酰胺酶的最佳活性pH) 等電點(diǎn) 6.9-7.0
抑制劑 DFP、PMSF、TLCK 來源 細(xì)菌
穩(wěn)定性 ??? 溶于pH 值5.0-12.0 的緩沖液中,可于4℃穩(wěn)定保存。溶于pH 值6.0-11.0 的緩沖液中,可于30℃穩(wěn)定保存,但是50℃及以上不穩(wěn)定。
單位定義  一單位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 時(shí)每分鐘產(chǎn)生1 μmol 對(duì)硝基苯胺所需的酶量。
底物特異性  水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
 非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

 

◆產(chǎn)品列表 原裝進(jìn)口-蛋白肽測序試劑-質(zhì)譜級(jí)賴胺酰肽鏈內(nèi)切酶

產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品規(guī)格 產(chǎn)品等級(jí)
125-05061 Lysyl?Endopeptidase,?MS?Grade
賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶,MS級(jí)
20μg?x?5 質(zhì)譜級(jí)
125-02543 Lysyl?Endopeptidase?(R)
賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
1vial(2AU) for?Biochemistry
129-02541 Lysyl?Endopeptidase?(R)
賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
1vial(10AU) for?Biochemistry