產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 | 產品等級 | 產品價格 |
球狀體·細胞透明化試劑
SCALEVIEW?-S4
SCALEVIEW?-S是組織透明化試劑??赏ㄟ^使用SCALEVIEW?-S0 – SCALEVIEW?-SMt等六種產品進行組織透明化處理。
其中,可單獨使用SCALEVIEW?-S4透明化球狀體或細胞。只需將目標樣品浸入SCALEVIEW?-S4即可。
◆特點
● 只需浸泡即可實現(xiàn)簡單透明化
● 透明化耗時短(1日左右)
● 不需要特殊的設備
● 可配合熒光抗體標記和熒光素觀察
◆T47D細胞球狀體觀察實例
Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).
圖1. SCALEVIEW?-S4透明化T47D細胞球體的圖像示例(細胞核使用Hoechst染色)4)。
使用共聚焦顯微鏡Z-堆疊獲得的球狀體圖像。
圖2. T47D細胞球狀體經諾考達唑處理后,使用組蛋白H3抗體的測量實例。
通過SCALEVIEW?-S4的透明化處理,可觀察藥物施用對球狀體表面和內部的影響。
◆操作步驟圖示
◆SCALEVIEW?-S4 Neurosphere的觀察實例
數據提供:
國立研究開發(fā)法人理化學研究所
腦神經科學研究中心細胞技能探索技術研究組/ 光量子工學研究中心生命光學技術研究組 濱裕先生、星田哲志先生、宮脇敦史先生
協(xié)助:olympus 株式會社
Neurosphere的觀察實例
(※試劑使用量推薦前處理和透明化均為各試劑:1.2mL?!鶡晒饪贵w標記基于AbScale方案。)
固定 | 前處理 | ||||
灌注固定+固定 4%PFA/PBS(-) 【pH 7.6-7.8】 |
前處理1 SCALEVIEW?-S0 |
透明處理1 SCALEVIEW?-A2 |
透明處理2 8 M Urea Solution |
透明處理3 SCALEVIEW?-A2 | 洗凈 deScale Solution |
4 ℃, 3 day | 37 ℃, 4 hr | 37 ℃, 4 hr |
37 ℃, 12 hr |
37 ℃, 4 hr | 4 ℃, 6 hr |
熒光抗體標記 | 透明化 | 觀察 | ||||
Blocking 1% Blocking Reagent(Roche)/ PBS(-) |
抗體標記【例:標記Iba1抗體】 AbScale Solution |
洗凈 AbScale Solution |
再固定 4% PFA/PBS(-)【pH 7.6-7.8】 |
洗凈 deScale Solution |
透明化 SCALEVIEW?-S4 37 ℃,4 hr |
固定 SCALEVIEW?-S4 搖動1小時后固定* |
室溫,2 hr | 37 ℃, >1 day |
室溫, 2 hr ×1、 1 hr ×1 |
室溫,1 hr | 4 ℃,3 hr | 37 ℃,4 hr | 室溫 |
*透明化后,使用1.5%(wt / vol)瓊脂糖嵌入并固定。
成年大鼠海馬神經干細胞神經球狀體的三維免疫熒光 —使用AbScale法—
參考文獻
1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).
2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).
3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019
4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).
◆產品信息
產品編號 | 產品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
194-18561 | SCALEVIEW-S4 SCALEVIEW-S4組織透明化試劑 |
組織透明化用 | 250 mL |
◆相關產品
產品編號 | 產品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
193-18455 | SCALEVIEW-A2 SCALEVIEW? 組織透明化試劑A2 |
組織透明化用 | 500 mL |
196-18521 | SCALEVIEW-S0 SCALEVIEW? 組織透明化試劑S0 |
組織透明化用 | 250 mL |
041-34425 | deScale Solution 透明化洗滌溶液 |
組織透明化用 | 500 mL |
294-35631 | See Through Chamber, 0.3mm thick 透明室,0.3mm厚 |
組織透明化用 | 10 set |
291-35641 | See Through Chamber, 0.5mm thick 透明室,0.5mm厚 |
組織透明化用 | 10 set |
295-35661 | See Through Chamber, 1.0mm thick 透明室,1.0mm厚 |
組織透明化用 | 10 set |
292-35671 | See Through Chamber, 2.0mm thick 透明室,2.0mm厚 |
組織透明化用 | 10 set |
299-35681 | See Through Chamber, 3.0mm thick 透明室,3.0mm厚 |
組織透明化用 | 10 set |
相關資料
透明化試劑方法選擇流程.pdf
組織透明化試劑Q&A ver1.0
Tissue clearing reagent Q&A ver1.0
Q:組織透明化的原則
A:組織透明化通常是按下面的步驟進行的:
A:(a)固定 (b)透化 (c)脫色 (d)折射率匹配
Q:組織透明化的優(yōu)勢
A:目前大多數可用的透明化技術,都是通過編碼熒光報告蛋白或者用熒光標記抗體進行后標記,從而可視化
A:組織中特定的蛋白。組織透明化成為了具有單細胞分辨率的組織3D成像中重要的一環(huán)。
Q:透明化技術的比較
A:下面是水性的透明化技術。
A:SeeDB(基于果糖的方法)在一些應用中有一定優(yōu)勢。因為SeeDB不含去垢劑,所以對于透明化DiI(細胞膜
A:紅色熒光探針,一種神經示蹤劑)標記的樣品和使用光電關聯(lián)顯微鏡(CLEM)的情況下,SeeDB有著一定優(yōu)
A:勢。另外SeeDB會產生自體熒光,有時候會對辨認未標記的神經元結構(如神經氈)起著一定幫助。
A:SeeDB2是為使用高NA物鏡的高分辨率成像而優(yōu)化的技術;因此,當處理較大的組織時,CLARITY或者CUBIC
A:會是更好的選擇。
Q:切片厚度的最大值和最小值?
A:您應該根據您的物鏡的WD(工作距離)來決定切片的厚度。我們建議切片的厚度不要超過3mm。對于十分薄
A:且脆弱的樣品,我們建議使用瓊脂糖包埋。
A:使用CUBIC,可以讓全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重復性。
Q:試劑盒成分
A:具體如下:
A:1. SCALEVIEW-S試劑盒(299-79001)適用于20份1-2mm的切片樣品
A:A:1) SCALEVIEW-S0——100mL
A:A:2) SCALEVIEW-S1——100mL
A:A:3) SCALEVIEW-S2——100mL
A:A:4) SCALEVIEW-S3——100mL
A:A:5) SCALEVIEW-S4——100mL
A:A:6) SCALEVIEW-SMT——100mL
A:2. SCALEVIEW-S試劑盒(290-80801)適用于20-30份1-2mm的切片樣品。
A:A:1) SCaleCUBIC-1 Solution——250mL
A:A:2) SCaleCUBIC-2 Solution——250mL
A:A:3) Mounting Solution 1——40mL
A:A:4) Mounting Solution 2——40mL
A:3. SeeDB試劑盒(299-79901)適用于20-30份1-2mm的切片樣品。
A:A:1) SeeDB:20w/v% Fructose Solution——50mL
A:A:2) SeeDB:40w/v% Fructose Solution——50mL
A:A:3) SeeDB:60w/v% Fructose Solution——50mL
A:A:4) SeeDB:80w/v% Fructose Solution——50mL
A:A:5) SeeDB:100w/v% Fructose Solution——50mL
A:A:6) SeeDB——50mL
A:4. SeeDB2試劑盒(294-80701)適用于20-30份1-2mm的切片樣品。
A:A:1) Saponin(皂角苷)——5g
A:A:2) SeeDB2G solution——50mL
A:A:3) SeeDB2S solution——50mL
A:A:4) PBS——50mL
Q:樣品的保存
A:SCALEVIEW-S處理的樣品應在室溫下保存2至3周。您可以在2至3周內觀察SCALEVIEW-S透明化的樣品中的
A:熒光信號。
A:CUBIC處理的樣品應在室溫下保存1周。您可以在1周內觀察CUBIC透明化的樣品中的熒光信號。
A:SeeDB2G處理的樣品應在冰箱中保存1年,而SeeDB2S處理的樣品則可在室溫下保存1年。您可以在1年內觀
A:察SeeDB透明化的樣品中的熒光信號。
Q:抗體的熒光標記
A:應在進行透明化前就進行抗體的熒光標記。
Q:適用于SCALEVIEW-S的顯微鏡
A:SD-OSR(Olympus)
A:FV-OSR(Olympus)
Q:適用于CUBIC的顯微鏡
A:SD-OSR(Olympus)
A:FV-OSR(Olympus)
A:Zeiss Lightsheet Z.1(Carl Zeiss)
Q:適用于SeeDB2的顯微鏡
A:Confocal(最好使用高NA的油浸鏡頭)
A:STED(Leica Microsystems)
A:SR-SIM(Carl Zeiss)
A:SD-OSR(Olympus)
A:FV-OSR(Olympus)
A:Airyscan(Carl Zeiss)
A:HyVolution(Leica Microsystems)
A:Two-photon(最好使用復合浸沒鏡頭)
A:Confocal(最好使用高NA的甘油浸鏡頭)
A:Light-sheet DLS(Leica,最好使用定制鏡面的設備)
Q:重構
A:對于定量用途,我們建議使用Neurolucida系統(tǒng)(MBF)。我們同樣測試了VAST Lite用于成像用途時的表
A:現(xiàn)。重構時也可以使用開源軟件。例如,Vaa3d可以處理大量的拼接圖像的數據。
Q:物鏡推薦
Q:其他物種?其他器官?
A:對于昆蟲樣品和魚類樣品,建議選擇CUBIC。
A:昆蟲相關文獻:Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).
A:魚類相關文獻:Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).
對于多細胞球狀體,選擇SCALEVIEW-S會更好。
https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0
參考文獻
1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).
2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).
3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019
4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).